«СОЮЗА ССР СПЕРМА БЫКОВ ЗАМОРОЖЕННАЯ МЕТОДЫ БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ГОСТ 2 7 7 7 7 -8 8 (СТ СЭВ 5 9 6 1 -8 7 ) Издание официальное S' Цена 3 коп. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ...»
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР
СПЕРМА БЫКОВ ЗАМОРОЖЕННАЯ
МЕТОДЫ БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГОСТ 2 7 7 7 7 -8 8
(СТ СЭВ 5 9 6 1 -8 7 )
Издание официальное
S'
Цена 3 коп .
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ
Москва льняные скатерти УДК 619:611-013.11.001.4:006.354 Группа Р39СОЮЗА ССР
государственный стандартСПЕРЛА БЫКОВ ЗАМОРОЖЕННАЯ
ГОСТ Методы биологических исследований 2 7 7 7 7 -8 8 Frozen sperm of bulls .Methods of biological tests (СТ СЭВ 5 0 6 1 -8 7 ) ОКСТУ 9809 Срок действия с 01.07.89 до 01.07.94 Несоблюдение стандарта преследуется по закону Настоящий стандарт распространяется на замороженную спер му быков и устанавливает методы определения подвижности спермиев, количество спермиев с прямолинейным поступательным движением и выживаемость спермиев в замороженной сперме бы ков после ее оттаивания .
1. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ СПЕРМИЕВ
1.1. Сущность метода заключается в визуальном определении с помощью микроскопа в раздавленной капле спермы количест венного отношения спермиев с прямолинейным поступательным движением к их общему числу
1.2. А п п а р а т у р а, м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы Микроскоп биологический .
Термостат с водяной рубашкой, обеспечивающий поддержание температуры спермнси (39±1)С С .
Баня водяная, обеспечивающая температуру (39±1)°С .
Столик электрообогревательный к микроскопу с постоянной температурой (39±1)°С .
Корнцанг .
Пинцет анатомический по ГОСТ 21241—77 .
Ножницы по ГОСТ 21239—77 .
Стекла предметные по ГОСТ 9284— 75 .
Стекла покровные по ГОСТ 6672—75 .
Пипетки пастеровские .
Издание официальное Перепечатка воспрещена fb Издательство стандартов, 1988 С. 2 ГОСТ 2 7 7 7 7 -8 8 Пипетки мерные вместимостью 5 см3 2-го класса точности по ГОСТ 20292—74 .
Пробирки вместимостью 2 см3 по ГОСТ 25336—82 .
Пробки резиновые для пробирок .
Салфетки марлевые стерильные .
Натрий лимоннокислый раствор с массовой долей 2.9% .
Натрийхлористый раствор с массовой долей 3% .
П р и м е ч а н и е. Допускается использовать аппаратуру, мерную посулу или другие мерные средства измерения, имеющие такие же или лучшие метро логические характеристики .
1.3. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю 1.3.1. От каждой серии замороженной спермы, расфасованной в соломинки, облицованные или необлицованные гранулы, отби рают из жидкого азота по две дозы и помещают в отдельный со суд Дьюара .
1.3.2. В чистую стерильную пробирку мерной пипеткой вносят 0,5 см3 раствора хлористого натрия с массовой долей 3% (про бирка Л» 1, а в другую пробирку — 0.5 см3 раствора лимоннокис лого натрии с массовой долей 2,9% (пробирка № 2). Затем про бирки закрывают резиновыми пробками и ставят в термостат при температуре (39±1)°С .
1.3.3. Соломинки или облицованные гранулы со спермой с по мощью охлажденного корнцанга, а необлицованные гранулы с помощью охлажденного анатомического пинцета вынимают из сосуда Дьюара. Соломинки или облицованные гранулы погружают в водяную баню при температуре воды (39±1)°С на 10 с, а затем вынимают, протирают насухо стерильной салфеткой. Ножница ми отрезают оба конца двух соломинок или один конец от каж дой из двух облицованных гранул .
Одну дозу спермы из соломинки, облицованной гранулы или необлицованной гранулы помещают в пробирку № 1, вторую дозу — в пробирку Ns 2 .
1.3.4. Объем содержимого пробирок № 1 и 2 довозят до I см3 соответственно раствором хлористого натрия с массовой долей 3% и раствором лимоннокислого натрия с массовой долей 2,9%, а затем пробирки закрывают резиновыми пробками и перемеши вают. Пробирку № 2 помещают в термостат при температуре
1.4. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 1.4.1. На электрообогрснательный столик микроскопа помеща ют предметное стекло и после его нагрева до (39=tl)°C стериль ной пастеровской пипеткой из пробирки N? 2 наносят небольшую каплю оттаянной спермы и покрывают стеклами. Устанавливают увеличение, дающее возможность добиться четкого изображения, и, просматривая весь препарат, выбирают участок с небольшим движением спермиев. Определяют визуально в трех полях зрения ГОСТ 27777-R 8 С. 3 соотношение спермнев с прямолинейным поступательным движе нием (ППД) к общему количеству спермнев, включая и непод вижных спермиев. а также спермнев, имеющих манежное и коле бательное движение .
1.5. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в Результаты исследований оценивают в процентах или баллах (1 балл соответствует 10% спермнев с прямолинейным поступа тельным движением) .
2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА СПЕРМИЕВ
С ПРЯМОЛИНЕЙНЫМ ПОСТУПАТЕЛЬНЫМ ДВИЖЕНИЕМ
2.1. С у щ н о с т ь м е т о д а Метод заключается в определении общего количества спер миев в дозе с учетом их подвижности .
2.2. А п п а р а т у р а, м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы Для проведения исследования применяют аппаратуру, мате риалы и реактивы, указанные в п. 1.2, а также .
счетную камеру клеток крови глубиной 0,1 мм и 1/250 мм3;
покровные стекла к счетной камере клеток крови .
2.3. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю Подготовка к исследованию—по п. 1.3 со следующими допол нениями .
2.3.1. Подготовленную сперму в пробирке A ? 1 тщательно пе S ремешивают, мерной пипеткой отбирают 0,1 см3 и переносят в отдельную градуированную пробирку. Объем содержимого про бирки доводят до 2 см3 раствором хлористого натрия с массовой долей 3% .
2.3.2. Счетную камеру клеток крови предварительно моют и насухо вытирают марлевой салфеткой, покрывают покровным стеклом и притирают его до появления радужных колец .
2.4. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 2.4.1. Содержимое градуированной пробирки, подготовленное по п. 2.3.1, тщательно перемешивают и вносят пастеровской пи петкой каплю под покровное стекло счетной камеры .
2.4.2. Счетную камеру помещают на предметный столик под объектив так, чтобы в поле зрения помещался один большой квадрат сетки при увеличении 200х. Спермин подсчитывают в 5 больших квадратах (80 малых) по диагонали сетки. Считают го ловки спермиев внутри больших квадратов, а также на левых и верхних линиях этих квадратов. Из каждого разбавления приго тавливают два препарата и средний результат двух подсчетов является основой для вычисления концентрации спермиев в дозе .
Количество спермиев в 1 дозе (Кс) равняется их числу, подсчи танному в 5 больших квадратах .
Определяют подвижность спермиев по разд. 1 .
С 4 ГОСТ 27777—88
Э. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЫЖИВАЕМОСТИ СПЕРМНЕВ ПРИ
« " С ПОСЛЕ ЕЕ ОТТАИВАНИЯ
3.1. С у щ н о с т ь м е т о д а Метод заключается в определении количества спермнев, сохра нивших прямолинейное поступательное движение после оттаива ния и 5 ч хранения спермы в термостате при температуре 38°С .
3.2. А п п а р а т у р а, м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы Аппаратура, материалы и реактивы — по пп. 1.2 и 2.2 .
3.3. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю 3.3.1. Оттаянную сперму в пробирке № 2 инкубируют в тер мостате с водяной рубашкой при температуре 38°С .
3.4. П р о в е д е н и е исследования 3.4.1. После 1, 2, 5 ч инкубации спермы в термостате опреде ляют подвижность спермнев по разд. I .
3.4.2. Количество спермнев с прямолинейным поступательным движением определяют по разд. 2 .
3.5. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в Спермин имеют выживаемость не менее 5 ч, если при иссле довании спермы после 5 ч инкубации ее в термостате при темпе ратуре 38°С в ней обнаруживают не менее 5% (0,5 балла) спер мнев с прямолинейным поступательным движением .
ГОСТ 2 7 7 7 7 -8 8 С 8
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР
ИСПОЛНИТЕЛИ:
В. Т. Горин, Н. П. Юцснко, Л. А. Зииевич2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Го сударственного комитета СССР по стандартам от 08.07.8В J* 2042
3. Срок первой проверки — 1992 г .
4. Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 5961—87 .
5. ВЗАМЕН ГОСТ 20909.4—75 в части разд. 2 и ГОСТ 26030—83 в части п. 3.2.3 .
6. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕН
Ой&«чв «Змак Почета» Иахптмьстко ггалдадгла. 1ВМ0. Москм. ГСП. НовочсесвенскиЯ пер.. i Тки. «Московская печатями». Москва. Лялнм =ер.. 6. Зам. Ж 9
[ 
«