WWW.LIT.I-DOCX.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - различные публикации
 


«ШОРИНА Марина  Владимировна АККУМУЛЯЦИЯ КАДАВЕРИНА И ЕГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ ПРИ ДЕЙСТВИИ СОЛЕВОГО СТРЕССА ...»

На  правах рукописи

ШОРИНА Марина  Владимировна

АККУМУЛЯЦИЯ КАДАВЕРИНА И ЕГО

ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ ПРИ ДЕЙСТВИИ

СОЛЕВОГО СТРЕССА

03.00.12 - «физиология и биохимия растений»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Москва - 2005

Работа  выполнена  в  лаборатории  молекулярных  и  физиологических механизмов  адаптации  Института  физиологии  растений  им.  К.А .

Тимирязева РАН

Научный  руководитель:

доктор биологических наук, профессор  Шенякова  Нина Ивановна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, академик РАЕН  Обручева Наталья Владимировна кандидат биологических наук, доцент  Пильщикова  Наталия Владимировна Ведущая  организация:  Вологодский  Государственный  Педагогический Университет,  естественно-географический  факультет Защита  состоится  26  апреля  2005  г.  в  13.00  часов  на  заседании Диссертационного совета К 002.210.01  при Институте физиологии растений им .

К.А. Тимирязева РАН по адресу:  127276, Москва, ул. Ботаническая, 35 .

Факс: (095) 977 8018, e-mail: tfr@ippras.ru .

С  диссертацией  можно  ознакомиться  в  библиотеке  Института  физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН .

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук  М.И. Азаркович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность.  В  настоящее  время  во  многих  лабораториях  мира  ведутся интенсивные  исследования  в  области  адаптации  растительных  организмов  к неблагоприятным  факторам  окружающей  среды,  в  том  числе  к  одному  из главных  абиотических  стрессоров  -  засолению.  Большой  интерес  вызывает участие  полиаминов  в  стресс-реакциях  и  адаптации  растений  к экстремальным условиям  среды.  Во  многих  работах  показано,  что  полиамины  в  условиях адаптационного  процесса  проявляют  защитные  свойства  (Galston  et  al.,  1997;

Bouchereau  et  al.,  1999).  При  этом  обращает на  себя  внимание  тот  факт,  что  в основном исследуется метаболизм и биологическая роль полиаминов семейства путресцина (путресцин, спермидин, спермин) .

Гораздо  менее  изученным  полиамином  следует  признать  кадаверин.  По сравнению  с  путресцином  и  его  производными  (спермидин  и  спермин) специальные  исследования  по  аккумуляции  кадаверина  при  действии  на растения  абиотических  стрессоров  практически  не  проводились.  Только спорадически  единичные  сведения  об  его  аккумуляции  в  растениях  в стрессорных условиях можно встретить в публикациях .

Известно,  что  регуляция  полиаминами  физиологических  процессов осуществляется  в  тесном  взаимодействии  с  этиленом.  Подавляющая  часть проведенных  в  этом  направлении  исследований  также  касается  лишь полиаминов  семьи  путресцина,  что  вполне  естественно,  поскольку  у  этих полиаминов  с этиленом имеется  общий  предшественник -  S-аденозилметионин (SAM) (Altaian,  1986;  Kaur-Sawhney,  1995) .

В  подобных  исследованиях  практически  не  уделялось  внимания кадаверину,  хотя  процессы  биосинтеза  этилена,  полиаминов  (спермидина  и спермина)  и  кадаверина  косвенно  связаны,  поскольку  кадаверин  образуется  в боковом  ответвлении  аспартатного  пути,  ведущего  к  биосинтезу  метионина  и SAM .





Тем не менее,  в ряде работ еще в 90-е годы было установлено необычное поведение кадаверина в отношении этилена и полиаминов группы путресцина у некоторых  кадаверин-содержащих  видов  растений  (Apelbaum  et  al.,  1985;

Bakhanashvili et al.,  1985; Icekson et al.,  1986). Недавно в ряде исследований (Дам, 1999;  Kuznetsov  et  al.,  2000;  Кузнецов  и  др.,  2000;  Shevyakova  et  al.,  2001;

Kuznetsov  et  al.,  2002)  был  обнаружен  необычный  характер  взаимодействия кадаверина и этилена у хрустальной травки в условиях теплового шока, который являлся  не  конкурентным,  как  в  случае  со  спермидином,  а  скорее синергическим.  Хрустальная  травка  отвечала  на  тепловой  шок  транзиторным выделением  этилена  и  последующей  межорганной  транслокацией  кадаверина, что  могло  быть  связано  с  процессами  адаптации  и  выживания  растений  в экстремальных  условиях .

Однако,  особенности  аккумуляции  кадаверина  при  действии  других абиотических  стрессоров,  в  частности  засоления,  а  также  характер  отношений между кадаверином и этиленом в этих условиях, в настоящее время практически не  изучены.  Не  выяснена  также  биологическая  роль  кадаверина  при  стрессе .

Изучение  данных  вопросов  способно  внести  определенный  вклад  в  выяснение общих механизмов адаптации растений к действию абиотических стрессоров .

Цели  и  задачи  исследования.  Настоящая  работа  является продолжением  выше  указанных  исследований  в  направлении  более углубленного  изучения  способности  растений  хрустальной  травки аккумулировать  кадаверин  при  солевом  стрессе  (NaCl),  выяснения  механизмов индуцирующего действия этилена, установления  связи аккумуляции кадаверина с  функционированием  САМ-фотосинтеза  и  его  возможной  физиологической роли в условиях засоления .

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1.  Определить  содержание кадаверина у растений трех возрастных  групп в  норме  и  при  засолении  NaCl  и  сравнить  его  с  изменениями  в активности  лизиндекарбоксилазы  (ЛДК)  и  содержанием  полиаминов семейства путресцина .

2.  Установить  изменения  в  эндогенном  уровне  этилена  у  хрустальной травки  при  действии  NaCl  и  исследовать  взаимовлияние  экзогенного этилена и кадаверина в опытах с изолированными листьями .

3.  Исследовать  механизмы  индуцирующего  действия  этилена  на аккумуляцию  кадаверина  в  опытах  с  изолированными  листьями  при экспонировании  их  в  присутствии  предшественника  этилена  1аминоциклопропан-1 -карбоксиловой  кислоты  (АЦК)  и  при  действии NaCl .

4.  Выяснить,  включаются  ли  процессы фосфорилирования/дефосфорилирования белков как компоненты цепи трансдукции  этиленового  сигнала  в  образование  кадаверина,  проведя для этой цели ингибиторный анализ .

5.  Исследовать,  вовлекается  ли  кадаверин  и  этилен  в  индукцию  САМтипа фотосинтеза, применив для этой цели оценку уровня  мРНК гена ключевого  фермента  (Ррс  1)  САМ-метаболизма фосфоенолпируваткарбоксилазы (ФЕПК) с помощью метода обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) .

6.  Изучить  влияние  экзогенного  кадаверина  на  процесс  растяжения гипокотилей  проростков  и  рост  корешков  проростков  хрустальной травки и арабидопсиса и сравнить с действием на эти параметры АЦК, а  также  выяснить  влияние  долговременной  обработки  растений хрустальной травки экзогенным кадаверином на накопление биомассы и определить изменения в составе полиаминов .

7.  Исследовать  суточную  динамику  содержания  кадаверина  в  корнях  и листьях  растений  хрустальной  травки  в  период  протекания  САМфотосинтеза .

Научная  новизна.  Впервые  продемонстрировано,  что  компетентность растений  хрустальной  травки  к  аккумуляции  кадаверина  и  полиаминов  семьи путресцина в норме находится под онтогенетическим  контролем,  а в регуляцию их  эндогенного  уровня  при  действии  солевого  стресса  включается  этилен .

Подтвержден  ранее  установленный  характер  взаимодействия  в  системе этилен/полиамины:  синергический  в  отношении  этилен  кадаверин  и реципрокный  в  отношении  этилен  спермидин.  Впервые  установлено,  что этилен-индуцированное  образование  кадаверина  в  листьях  хрустальной  травки может быть  опосредовано процессами  фосфорилирования/дефосфорилирования белков  на  этапе  трансдукции  этиленового  сигнала.  Впервые  представлены экспериментальные доказательства того, что аккумуляция в листьях хрустальной травки  кадаверина  и  повышенное  образование  в  них  этилена  не  имеют отношения  к регуляции экспрессии  стресс-индуцибельного  гена ФЕПК  (Ррс  1) на  уровне  аккумуляции  соответствующей  мРНК.  Впервые  установлены суточные  колебания  содержания  кадаверина  в  листьях  и  корнях  хрустальной травки в  фазе  САМ-фотосинтеза.  Показана двойственность действия кадаверина на  процесс  растяжения  пшокотилей  проростков  хрустальной  травки:

стимуляция  при  низких  концентрациях  диамина  (0,2-1,0  мМ)  и  торможение растяжения при высоких (свыше 2,0 мМ), что может иметь адаптивное значение в условиях засоления .

Практическая значимость. Полученные в работе теоретические данные о  механизмах  аккумуляции  кадаверина  и  полиаминов  семьи  путресцина  у хрустальной  травки  в  условиях  засоления  имеют  существенное  значение  для выяснения  хода  формирования  адаптивных  процессов  у  галофитов  и  при разработке  технологии  создания  трансгенных  модельных  растений  с повышенной  солеустойчивостью.  Теоретические  обобщения  и  совокупность экспериментальных  данных  работы  могут  использоваться  в  курсах  лекций  для студентов биологических факультетов и вузов страны .

Апробация  работы.  Результаты  исследований  докладывались  на международной конференции  «Актуальные вопросы  экологической  физиологии растений в XXI веке» (Сыктывкар, 2001),  на международном  симпозиуме  «Plant under  Invironmental  Stress»  (Москва,  2001),  на  V  Съезде  общества  физиологов растений  России  и  Международной  конференции  «Физиология  растений  основа фитобиотехнологии» (Пенза, 2003) .

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 работ .

Структура  и  объем  диссертации.  Диссертация  состоит  из  введения, обзора  литературы,  описания  объекта  и  методов  исследований,  изложения полученных результатов,  обсуждения,  заключения  и  выводов.  Работа изложена на  138  страницах  машинописного  текста,  включая  6  таблиц,  35  рисунков;

библиография содержит 199 названий, в т.ч. 170 на иностранных языках .

ОБЪЕКТ  МЕТОДЫ 

И  ИССЛЕДОВАНИЙ

Объектом  исследования  служила  хрустальная  травка  (Mesembryanthemum crystallinum L.), которая принадлежит к кадаверин-содержащим видам. Растения выращивали  в  условиях  водной  культуры  на  питательном  растворе  Джонсона (Johnson,  1957),  модифицированном  по  Winter (1973),  в  камере  фитотрона  при 23-25  °С  и  относительной  влажности  воздуха  ~55%  в  дневное  время  суток .

Ночью  температуру  и  влажность  воздуха  поддерживали  на  уровне  15-17°С  и ~70%,  соответственно.  Длина  фотопериода  составляла  14  ч  при  освещенности 350+50  мкмоль.м-2.секунд-1 .

Засоление  (300-400  мМ  NaCl)  проводили  ступенчато,  увеличивая концентрацию NaCl на 100 мМ каждый день до требуемой концентрации .

Для  опытов  с  экспонированием  изолированных  листьев  в  присутствии предшественника  этилена  АЦК  или  NaCl  использовали  6  пару  настоящих листьев  взрослых  растений  с  САМ-типом  фотосинтеза  и  3-4  пару  листьев молодых  растений,  произраставших  на  контрольной  среде  (без  засоления) .

Листья  срезали  и  экспонировали в чашках Петри  в  воде  (контроль)  и  в  водных растворах с добавками: NaCl (300 мМ) или АЦК (50 мкМ) или NaCl (300 мМ) + АЦК  (50  мкМ)  в  течение  2-х  и  4-х  часов  в тех  же  световых  условиях,  которые указаны выше .

В  экспериментах  по  влиянию  кадаверина  и  этилена  на  удлинение гипокотиля  и  зародышевого  корешка  проростков  хрустальной  травки,  семена проращивали в темноте в стерильных условиях в чашках Петри (4 дня при +4°С, 7 дней - при +25°С) в присутствии 0,2-2,0 мМ кадаверина или  10-40  АЦК .

В  опытах  с  ингибиторами  различных  компонентов  фосфорилирующего каскада 3  пару листьев 4-5-недельных растений срезали с контрольных растений и  черешками  погружали  в  водные  растворы  ингибиторов  на  3  часа  в  темноте, после  чего  отделенные  листья  экспонировали  в  атмосфере  этилена  или  на воздухе.  Обработку  растений  экзогенным  этиленом  (10  мкл  л" )  проводили  в герметичных  стеклянных  камерах  (V=20  л),  снабженных  специальными щтуцерами для  ввода этилена.  С  помощью шприца в  камеру  вводили заданное количество этилена. Время обработки этиленом: 4 часа .

В  опытах  по  влиянию  кадаверина  и  этилена  на  экспрессию  гена  ФЕПК экзогенный кадаверин (0,5 мМ), предшественник этилена АЦК (0,5 мМ) и NaCl (400  мМ)  вносили  в  корневую  среду.  Время  экспозиции  корней  в  водном растворе  кадаверина  и  АЦК  составляло  2  ч.  с  последующей  отмывкой  их  в дистиллированной  воде.  Обработку  корней интактных растений  кадаверином  и АЦК  проводили  дважды  в  течение  экспериментального  периода  (6  дней).  Для создания  повышенной  концентрации  этилена  на  листья  интактных  растений дважды  наносили  0,1-0,2  мМ  водный  раствор  2-хлорэтилфосфоновой  кислоты (этрэль) с добавлением 0,05% раствора Тритон Х-100 .

Свободные  полиамины  определяли  в  виде  их  бензоильных  производных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Flores, Galston, 1982) .

Эндогенный  уровень  в  листьях  этилена  определяли  методом  газовой хроматографии (Ракитин, Ракитин, 1986) .

Активность  ЛДК  определяли  спектрофотометрическим  методом  (Phan  et al,  1982; Beieretal.,  1987) .

Содержание  свободного  пролина определяли  в  кислой  среде  с  помощью нингидринового реактива по методу Бейтса с соавт. (Bates et al.,  1973), используя в качестве стандарта пролин фирмы "Serva" .

Измерения рН и титруемой кислотности в клеточном соке производили с помощью  рН-метра  фирмы  "Orion  Research"  (Швеция)  (Кузнецов  и  др.,  2000, Круглова,  2002) .

При  изучении  экспрессии  гена  ФЕПК  использовали  метод  обратной транскрипции  -  полимеразной  цепной реакции  (ОТ-ПЦР).  Тотальную РНК  из образцов  растительного  материала  выделяли  фенольным  методом  (Westhoff  et al.,  1981).  Препарат  РНК  обрабатывали  ДНКазой  в  течение  30  мин  при  37°С, после  чего  белки  удаляли  фенольной  депротеинизацией.  Обратную транскрипцию  проводили  в  соответствии  с  инструкцией  фирмы  "Fermentas", применив  oligo(dT)21VN  в  качестве  затравки.  ПЦР  осуществляли  с использованием  Tag-ДНК-полимеразы.  Последовательность  нуклеотидов  гена ФЕПК  и  контрольного  гена  актина  были  взяты  на  сайте  www.tigr.org  (The Institute for Genomic Research) .

Образцы растительного  материала для  измерения титруемой  кислотности отбирали  в  конце  темнового  (7.30)  и  в  конце  светового  (19.30)  периодов,  для изучения  влияния  кадаверина  и  этилена  на экспрессию  гена  ФЭПК  -  в  начале темнового  периода  (20.30),  для  изучения  суточных  колебаний  в  содержании кадаверина  -  в  течение  дня  и  ночи,  для  всех  остальных  анализов  -  в  11  ч .

Фиксация  материала  проводилась  жидким  азотом,  после чего  образцы  хранили до начала анализов при - 80 °С .

Все  опыты  проводили  в  трехкратной  биологической  повторности .

Результаты  обрабатывали  статистически  и  выражали  как  среднюю арифметическую  и  ошибку  репрезентативности  среднего  квадратического отклонения (Доспехов,  1985) .

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

1.  Возрастные  особенности  аккумуляции  кадаверина  и  полиаминов семейства  путресцина  у  хрустальной  травки  в  нормальных  условиях произрастания.  Для  исследования  онтогенетических  особенностей  содержания полиаминов  были  использованы  растения  трех  возрастных  групп, различающихся  по  морфологическим  и  физиологическим  признакам.  Первую группу  составляли  молодые  растения  (возраст  -  5  недель)  с  Сз-типом фотосинтеза,  которые характеризовались полностью  сформированными 3-й и 4ой  парами  листьев  и  отсутствием  боковых  побегов.  Растения  второй  группы (возраст - 7 недель) имели хорошо развитые первичные листья, зачатки боковых побегов  с  еще  неразвернувшимися  вторичными  листьями.  Третья  группа  была представлена  наиболее  онтогенетически  взрослыми  растениями  с  САМ-типом фотосинтеза,  имеющими  хорошо  развитые  вторичные  листья  (возраст  -  9 недель) .

Об  индукции  САМ судили  по  изменению  суточной  динамики  титруемой кислотности клеточного сока, которая являлась следствием накопления малата в листьях .

Прежде  чем  изучить  возрастные  особенности  накопления  кадаверина  у хрустальной  травки  целесообразно  было  провести  оценку  уровня  полиаминов путресцинового ряда у растений трех возрастных групп .

Как  видно  из  рис.  1,  листья  растений  разного  возраста  изначально различались  по  содержанию  главных  полиаминов.  Наибольшим  уровнем полиаминов (нмоль/г сырой массы) характеризовались растения второй группы, что,  вероятнее  всего,  связано  с  общей  перестройкой  растительного  организма, связанной  с  индукцией  САМ-типа  фотосинтеза.  Конститутивный  уровень доминирующего  у  хрустальной  травки  полиамина,  спермидина,  в  листьях растений  3-й  группы  был  в  10  и  7  раз ниже,  чем  в  листьях растений  2-й  и  1-й группы, соответственно .

Подобное  значительное  снижение  уровня  спермидина  у  наиболее онтогенетически  взрослых  растений  может  указывать  на  заметное  снижение активности  спермидин-синтазы  -  скорость  лимитирующего  фермента биосинтеза  полиаминов  (спермидина  и  спермина).  Можно  предположить,  что динамика изменений в концентрации спермидина скорее связана с активностью ростовых процессов  в листьях,  чем с онтогенетическим  переходом растений на САМ-тип фотосинтеза. Подобные результаты были получены в работе Дам (Дам, 1999) при исследовании динамики содержания спермидина  в онтогенезе листьев хрустальной травки .

Исследование  содержания  кадаверина  у  растений  трех  возрастных  групп показало  отсутствие  определяемых  концентраций  данного  диамина  в  листьях молодых  растений.  Кадаверин  был  обнаружен  в  листьях  растений  второй  и третьей  группы,  при  этом  его  аккумуляция  в  листьях  линейно  возрастала  с увеличением  возраста  растений,  достигая  максимума  у  растений  полностью перешедших на САМ-тип фотосинтеза (рис. 2) .

Характер изменения активности ЛДК - кадаверин-образующего фермента положительно  коррелировал  с  уровнем  кадаверина  у  растений  хрустальной травки 2-й и 3-й возрастной группы (рис. 2) .

Однако,  у  молодых  растений  хрустальной  травки,  не  накапливающих кадаверин, в листьях обнаружена высокая активность ЛДК (рис.  2). Отсутствие корреляции  между  активностью ЛДК  и  накоплением  кадаверина  в  этом  случае может объясняться высокой активностью диаминоксидазы у молодых листьев,  о чем  свидетельствует  усиленное  образование  в  них  Н 2 О 2  -  продукта окислительной деградации диаминов (Шевякова и др., 2003). Как установлено в лаборатории  молекулярных  и  физиологических  механизмов  адаптации  ИФР РАН  (Стеценко Л.А.,  неопубликованные данные),  в листьях молодых растений хрустальной травки активность диаминоксидазы оказывалась повышенной как в норме, так и при действии на растения NaCl .

Тагам  образом,  кадаверин,  который  можно  назвать  минорным полиамином  из-за  его  более  низкого  по  сравнению  с  основными  полиаминами содержания в растениях, у хрустальной травки обнаруживается на более поздних стадиях развития .

2. Изменения  в содержании кадаверина  и полиаминов путресцинового ряда у  хрустальной  травки  при  адаптации  к  засолению.  Одним  из  главных абиотических  факторов  природной  среды,  к  которому  хрустальная  травка вынуждена адаптироваться в процессе онтогенеза, является засоление. Известно, что  специализированная  адаптация  к  действию  NaCl  у  этих  растений проявляется  в  ускорении  перехода  на  эффективный  водосберегающий  путь фиксации  углекислоты  САМ-тип  фотосинтеза.  Для  опытов  с  засолением  в качестве стартовых использовали растения тех же трех возрастных групп .

В результате исследований установлено, что после 6  суток произрастания в  присутствии  NaCl  (300  мМ)  эндогенный  уровень  спермидина  в  листьях молодых  растений  (1-я  группа)  и  растений  s  фазе  начала  индукции  САМ (2-я группа)  имел  тенденцию  к  снижению,  но  з  них  з  3  к  более  раза  возрастало количество  спермина  (рис.  ЗА,  ЗБ).  В  листьях  САМ-растений  (3-я  группа)  в условиях  засоления  возрастало  содержание  обоих  полиаминов  -  спермидина  и спермина (рис. ЗВ) .

Таким  образом,  сравнение  изменений  в  содержании  полиаминов  семьи путресцина  в  листьях  растений  трех  возрастных  групп  хрустальной  травки выявило  редко  встречающееся  у  растений  накопление  в  условиях  засоления спермина. Подобная картина снижения количества путресцина и спермидина на фоне  увеличения  эндогенного  уровня  спермина  при  действии  солевого  стресса была указана для  солеустойчивого сорта Lycopersicon  esculentum  (Bouchereau et al., 1999) .

Исследование  аккумуляции  кадаверина у  хрустальной  травки  в  условиях засоления  свидетельствует  об  усилении  аккумуляции  кадаверина  при  действии NaCl.  При  этом,  повышение  содержания  кадаверина  происходило  только  у растений 2-й и 3-й возрастной группы (рис. 4) .

Таким  образом,  для  хрустальной  травки  оказалось  характерным повышенное накопление кадаверина в присутствие NaCl в первичных листьях на поздней стадии развития растений. При этом, характер аккумуляции кадаверина при  действии  NaCl  соответствовал  характеру  повышения  уровня  титруемой кислотности  клеточного  сока,  которое  является  следствием  повышения содержания малата при переходе растений на САМ-тип фотосинтеза в условиях засоления .

Совокупность  полученных  данных  позволяет  придти  к  выводу,  что  у факультативного  галофита  хрустальной  травки  аккумуляция  в  листьях  диамина кадаверина  положительно  коррелировала  с  периодом  протекания  САМ-типа фотосинтеза как конститутивного характера, так и индуцируемого засолением .

3.  Влияние  этилена  на  аккумуляцию  кадаверина.  Особое  место  в координации физиологических процессов у растений отводится взаимодействию полиаминов  и  этилена,  во  многом  оказывающих  на  растительный  организм противоположные  эффекты  (Galston  et  al.,  1997;  Shevyakova  et  al.,  2001;

Кузнецов  и  др.,  2002).  Ранее  было  обнаружено  этилен-зависимое  образование диамина  кадаверина у  хрустальной травки  в  условиях  гипертермии  (Дам,  1999;

Shevyakova  et  al.,  2001;  Кузнецов  и  др.,  2002).  Обработка  хрустальной  травки тепловым  шоком  (ТШ)  приводила  к  транзиторной  аккумуляции  этилена  и последующему накоплению и межорганному транспорту кадаверина .

В связи с этим представлялось важным выяснить, связана ли повышенная аккумуляция кадаверина в условиях засоления с образованием этилена .

Исследование  влияния  засоления  на  содержание  этилена  в  листьях хрустальной  травки  показало  увеличение  его  содержания  при  действии  NaCl (рис. 5) .

На  этом  основании  было  высказано  предположение,  что  у  хрустальной травки  сигнальным  фактором,  ответственным  за  накопление  кадаверина  в условиях засоления, также как и при гипертермии, может сказаться этилен .

Ранее  было  показано  индуцирующее  действие  этилена  на  образование кадаверина  в  срезанных  листьях  ювенильных  растений  М.  crystallinum,  не содержащих  кадаверин  -  обработка  листьев  этиленом  приводила  к  резкому повышению  в  них  содержание  кадаверина,  но  при  этом  эндогенный  уровень спермидина заметно снижался (Дам, 1999) .

Для  подтверждения  индуцирующего  действия  этилена  на  образование кадаверина были проведены опыты с изолированными первичными листьями (5пара)  САМ-растений  хрустальной травки. Листья  инкубировали  в присутствии прямого предшественника при биосинтезе этилена в растительных клетках АЦК (50 мкМ) как дополнительного источника повышения его эндогенного уровня. В качестве  теста  на  образование  кадаверина  использовали  изменение  активности ЛДК .

Полученные  данные  (рис.  6)  показали,  что  при  экспонировании изолированных  листьев  растений  в  период  САМ-фотосинтеза  экзогенная  АЦК (50  мкМ)  повышала  активность  ЛДК.  NaCl  (400  мМ)  снижал  активность фермента в первые 2 ч.,  а при инкубации листьев в течение 4 ч.  его активность восстанавливалась  и  превосходила  исходный  уровень  почти  в  2,5  раза.  Еще более  высокий  уровень  активации  ЛДК  был  характерен  для  совместного действия NaCl+АЦК (4 ч. экспозиции), что, возможно,  вызвано более высокой эндогенной концентрацией этилена, характерной для стрессорных условий .

На  основании  результатов  данного  опыта  можно  заключить,  что стимуляция  активности  фермента  могла  быть  опосредована  этиленом,  прямым продуктом  АЦК-оксидазы,  катализирующей  последний  этап  его  биосинтеза .

Полученные данные развивают высказанное ранее положение (Shevyakova et al., 2000;  Shevykova  et  al.,  2001;  Кузнецов  и  др.,  2002)  о  синергическом  характере отношений  этилена  и  кадаверина,  наиболее  выраженное  в  стрессорных условиях .

При  этом  обращает  на  себя  внимание  тот  факт,  что  инкубация изолированных листьев в присутствии предшественника этилена (АЦК) снижала содержание полиаминов, в том числе спермидина. Таким образом, подтвержден ингибирующий  эффект  этилена  на  содержание  доминирующего  у  хрустальной травки полиамина спермидина .

4.  Механизмы  этилен-индуцированного  образования  кадаверина.  Ранее  в опытах с мутантом Arabidopsis thaliana,  не чувствительным  к этилену (ein4), было  установлено,  что  ТШ-индуцируемый  транспорт  кадаверина  по  растению был связан с функционированием системы рецепции этилена (Shevyakova et al., 2001; Кузнецов и др., 2002). Вовлекаются ли при этом другие компоненты цепи передачи  этиленового  сигнала,  также  важные  и  для  включения  этилениндуцированного биосинтеза кадаверина, в настоящее время неизвестно. Такими процессами  могут  быть  реакции  фосфорилирования  белков,  тем  более,  что  из ряда работ  (Raz,  Fluhr,  1993;  Novikova  et  al.,  1993)  следует,  что  при  обработке растений этиленом происходило усиление процессов фосфорилирования белков в  цепи  передачи  этиленового  сигнала.  Однако,  вопрос  о  том,  вовлекаются  ли процессы  фосфорилирования/дефосфорилирования  белков  в  этилениндуцированное образование кадаверина, оставался открытым .

Для  того,  чтобы  выяснить  функционирование  этого  механизма  в сигнальной  цепи  этилена,  в работе были  использованы  ингибиторы различных компонентов  фосфорилирующего  каскада:  Na3VO4  предотвращает  активацию тирозиноБой  фосфатазы  (Novikova  et  al.,  1993),  NaF  -  блокатор  мембранных фосфатаз  (Tassoni  et al.,  1996),  апигенин -  некоторых МАП-киназ  (Cazale et al., 1998).  О  влиянии  ингибиторов  на  образование  кадаверина  судили  по  уровню активности ЛДК .

Как  показали  результаты  экспериментов,  все  примененные  в  работе ингибиторы  снимали  (на 70-80%)  стимулирующий эффект экзогенного этилена на активность ЛДК, лишь незначительно  влияя при этом на активность ЛДК в контрольных листьях, экспонированных в отсутствие этилена (рис. 7) .

Рис.  7.  Влияние  ингибиторов  протеинкиназ  и  протеинфосфатаз  на активность  ЛДК  в  изолированных  листьях  хрустальной  травки, экспонированных на воздухе (контроль) и в атмосфере этилена (10 мкл/л, 3 ч). Обозначения:  - без обработки  тиленом,  э - в атмосфере этилена .

На  основании  полученных  результатов  пришли  к  выводу,  что  в  этилениндуцированное  образование  кадаверина  могут  быть  вовлечены  процессы фосфорилирования/дефосфорилирования  белков  -  типичных  компонентов систем трансдукции гормонального сигнала .

В  связи  с  реципрокным  характером  взаимодействия  этилена  и спермидина, необходимым представлялось также оценить действие ингибиторов компонентов сигнальной цепи этилена (Na3VO4, NaF и апигенин) на образование данного полиамина .

Результаты экспериментов, проводимых по той же схеме, что и в опытах с кадаверином,  представлены  на  рис.  8.  Как  следует  из  рисунка,  в  листьях  (3-я пара), показавших стимулирующий эффект экзогенного этилена на образование кадаверина,  содержание  спермидина  снижалось  в  тех  же  условиях экспонирования  изолированных  листьев  в  атмосфере  этилена.  При  этом ингибиторы (Na3V04 и апигенин), примененные на фоне этилена, не влияли на уровень ингибирующего действия гормона на содержание полиамина .

Исключение  составил  NaF  (блокатор  мембранных  фосфатаз),  который частично снимал ингибирующий эффект этилена .

Рис.  8.  Влияние  ингибиторов  протеинкиназ  и  протеинфосфатаз  на содержание спермидина  в изолированных листьях (3-я  пара) хрустальной травки, экспонированных в атмосфере этилена (10 мкл/л, 3 ч.) .

Таким образом, можно предположить, что ингибирующий эффект этилена на  образование  спермидина  может  быть  также  частично  связан  с функционированием  мембранных  фосфатаз,  о  чем  свидетельствует  снятие ингибирующего  эффекта  этилена  в  присутствии  NaF  -  блокатора  мембранных фосфотаз .

5.  Влияние  аккумуляции  кадаверина  на  процессы  роста  и  развития.  Для изучения  влияния  этилена  и  кадаверина  на  элонгацию  клеток  был  проведен фенотипический  анализ  реакции  проростков  хрустальной травки  на различные концентрации  кадаверина  и  этилена  В  результате  проведенных  исследований установили,  что  кадаверин  в  диапазоне  концентраций  от  0,2  до  1,0  мМ активирует  удлинение  гипокотиля  этиолированных  проростков  хрустальной травки  (рис.  9).  Стимуляция  кадаверином  удлинения  корня  менее  выражена .

Установлено,  что  содержание  кадаверина  в  растворе  свыше  2,0  мМ  является ингибирующим для проростков хрустальной травки. Как следует из рис.  10,  10М  АЦК  тормозит  растяжение  как  гипокотиля,  так  и  корня,  что  является типичной ответной реакцией на этилен .

Таким  образом,  характер  действия  экзогенного  кадаверина  на  ростовой процесс  в  фазе  проростков  зависит  от  концентрации  диамина:  в  низких  действует  как  стимулятор  («гормональный»  эффект),  а  в  высоких  -  как ингибитор .

Для того чтобы оценить физиологическую роль аккумуляции кадаверина у хрустальной травки  в условиях засоления у  взрослых растений,  провели  опыты по  сравнительному  действию  экзогенного  кадаверина,  засоления  NaCl  и  их совместного  действия  на  рост  и  развитие  растений.  Длительная  (14  суток) ежедневная  обработка  листьев  1  мМ  кадаверина  ускорила  переход  растений  к репродуктивной  фазе  развития.  Это  выразилось  в  более  быстром  старении  и опадении  первичных  листьев  и  развитии  только  боковых  побегов,  что,  в конечном  итоге,  отразилось  на  снижении  биомассы.  В  этом  варианте  было отмечено  также  более  раннее  образование  репродуктивных  органов  и  начало цветения  по  сравнению  с  контролем.  Вместе  с  тем,  фенотип  растений  после обработки  листьев  кадаверином  практически  не  отличался  от  фенотипа растений,  произраставших  в  условиях  засоления.  Анализ  содержания полиаминов  показал,  что  в  этот  период  наблюдений  во  вторичных  листьях  в варианте  с  засолением  можно  было  обнаружить  в  основном  спермин  и кадаверин. В листьях,  получавших экзогенный кадаверин, также были найдены только эти полиамины, но в гораздо более высокой концентрации .

Таким образом, обнаруженный физиологический эффект долговременной обработки  растений  экзогенным  кадаверином,  проявившийся  в  ингибировании роста  и  ускорении  процессов  развития  у  хрустальной  травки,  сопровождался одновременной аккумуляцией в листьях самого кадаверина и спермина .

5. Влияние кадаверина  и этилена на экспрессию  гена  ключевого фермента САМ-метаболизма.  В  связи,  с  обнаружением  этилен-индуцированного образования  кадаверина у  хрустальной  травки,  приуроченного  к  фазе  перехода растений  на  САМ,  и  участия  этого  диамина  в  дистанционной  передаче стрессорного  сигнала  мы  предположили,  что  накопление  в  листьях  этилена  и кадаверина  в  условиях  заселения  может  активировать  экспрессию  стрессиндуцируемого гена (Ppcl) ключевого фермента  САМ-пути  фотосинтеза - ФЕПК на уровне  аккумуляции  соответствующих транскриптов.  Для  этого исследовали действие экзогенных кадаверина и этилена на экспрессию гена ФЕПК в листьях хрустальной  травки,  используя  для  этой  цели  метод  ОТ-ПЦР.  Для  опытов использовали растения хрустальной травки в возрасте 6-7 недель, находившиеся в  начале  перехода  на  САМ-тип  фотосинтеза.  В  результате  проведенных экспериментов  установлено,  что  уровень  титруемой  кислотности  в  листьях после  6  дней  воздействия  на  растение  вышеупомянутых  факторов  оказался повышенным только у растений, произраставших в условиях засоления. В этом же  варианте  листья  аккумулировали  пролин,  что  свидетельствовало  о стрессорном  воздействии  засоления.  Обработка  растений  экзогенным кадаверином,  АЦК  и  этрэлем  практически  не  вызвала  в  листьях  изменений  в уровне титруемой кислотности, т.е. признаки начала формирования  САМ у этих растений не проявились .

Как  следует  из  рисунка  11,  повышенная  экспрессия  гена  ФЕПК обнаружена  только  при  воздействии  на  растения  хрустальной  травки  NaCl .

Кадаверин  и  этилен  (варианты  с  обработкой  АЦК  и  этрэлем)  не  изменили содержания мРНК по сравнению с контролем .

Рис.  11.  Уровень  транскрипции  гена  ФЕПК  в  4-й  паре  листьев хрустальной  травки  в  контроле  (1),  на  б-е  сутки  после  засоления  (2)  и обработки  растений экзогенным кадаверином  (3),  1-аминоциклопропан-1карбоксиловой  ислотой  4),  -хлорэтилфосфоновой  ислотой  5) .

к (2 к ( На основании проведенных исследований заключили, что  аккумуляция в листьях  взрослых  растений  хрустальной  травки  диамина  кадаверина  и повышенное образование в них этилена не влияют на экспрессию  гена ФЕПК .

Таким  образом,  приуроченность  накопления  кадаверина  к  более  поздним стадиям  развития  не  была  связана  с  индукцией  САМ -  ключевым  механизмом адаптации  растений  к  водному  дефициту,  специфичным  для  группы  растений семейства  толстянковых,  а,  по  всей  видимости,  является  следствием онтогенетической адаптации хрустальной травки .

Суточные  колебания  содержания  кадаверина  в  листьях  и  корнях хрустальной травки в период САМ-фотосинтеза .

Учитывая способность полиаминов как органических катионов выступать в  качестве  метаболических  буферов  клеточной  рН,  представлялось  важным выяснить, может ли кадаверин проявлять эти свойства для регуляции клеточной кислотности,  вызванной  образованием  малата  во  время  протекания  САМфотосинтеза,  у  хрустальной  травки.  Ранее,  в  одной  из  работ,  посвященной исследованию  полиаминов  у  представителя  толстянковых  (Kalanchoe  и Bryophyllum),  были  обнаружены  синхронные  колебания  в  содержании полиаминов  (путресцина,  спермидина) и  малата в  ночной и  дневной периоды .

(Morel et al.,  1980). В связи с этим исследовали суточную ритмику содержания кадаверина  в  САМ-растениях  хрустальной  травки.  Как  следует  из  рисунка  12, содержание  кадаверина  в  листьях  и  корнях  испытывало  резкие  колебания  в течение  светового  и  темнового  периодов.  В  утренние  часы  (7  ч.)  содержание диамина  в  листьях  и  корнях  было  минимальным  и  постепенно  повышалось  в дневное  время  (13  и  16  ч.)  преимущественно  в  листьях,  когда  наблюдался массовый выход малата из  вакуолей в цитоплазму. В  начале темнового периода (20  ч.)  в  листьях,  когда  малат  был  израсходован  в  процессе декарбоксилирования, избыток кадаверина транспортировался в корни. Однако, ко времени интенсивного синтеза малата в ночной период (1 ч.) кадаверин снова оказывался  в  листьях.  Обнаруженные  суточные  колебания  содержания кадаверина  в  листьях  и  корнях хрустальной  травки  могли  быть  направлены  на нейтрализацию  кислой  рН  клеточного  сока,  создаваемой  при  аккумуляции малата, что ранее было показано для полиаминов семьи путресцина (Morel et al., 1980).  В  целом  ряде  публикаций  (Шевякова,  1981)  накопление  в  растениях диамина  путресцина  и  кадаверина  было  обнаружено  в  ответ  на  подкисление клеточного  сока  при  дефиците  К+  или  искусственном  создании  кислой  среды при  выращивании  многих  видов  растений.  Таким  образом,  сновываясь  на результатах  выше  упомянутых  работ,  можно  предполагать,  что  сама  кислая  рН служит индуктором образования диаминов .

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В  отличие  от  низкомолекулярных  метаболитов  с  осмопротекторной функцией,  вопрос  о  роли  полиаминов  в  формировании  солеустойчивости растений, в частности галофитов, остается открытым. В наибольшей степени это относится к кадаверину,  стресс-зависимая аккумуляция которого обнаружена не у всех видов растений. Факультативный галофит Mesembryanthemum crystallinun L.  (хрустальная  травка)  явился  важным  для  изучения  метаболизма  и  роли кадаверина  исключением:  аккумуляция  этого  диамина  у  типичного представителя толстянковых,  формирующих  водосберегающий  механизм  САМтипа,  оказалась  стресс  -  (гипертермия)  и этилен - зависимой,  что  до  нас  было обнаружено  в  лаборатории  физиологических  и  молекулярных  механизмов адаптации ИФР РАН  (Дам,  1999;  Shevyakova et  al.,  2000,  2001;  Кузнецов  и др., 2002) .

Настоящая работа является продолжением выше указанных исследований в направлении более углубленного изучения  способности растений хрустальной травки  аккумулировать  кадаверин  при  солевом  стрессе  (NaCl),  выяснения механизмов индуцирующего действия этилена, установления связи аккумуляции кадаверина  с  функционированием  САМ-метаболизма  и  его  возможной физиологической роли в условиях засоления .

Проведенные  исследования  показали,  что  определяемые  количества свободного  кадаверина  в  первичных  листьях  контрольных  растений  найдены только у онтогенетически взрослых растений,  находящихся в начале перехода с С3  на  С МТ П  фотосинтеза  или  полностью  его  сформировавших.  В  условиях А -И постепенного засоления (300 мМ, 6 суток) компетенция растений к аккумуляции кадаверина  также  определялась  его  онтогенетическим  статусом  и  совпадала  с развитием  САМ-метаболизма.  Аккумуляция кадаверина у растений как в норме, так  и  в  условиях  засоления  однозначно  была  связана  с  увеличением  их онтогенетического  возраста,  совпадающего  с  переходом  растений  к репродуктивной фазе развития, когда у растений снижается ростовая активность первичных листьев и начинается образование вторичных побегов .

Известно,  что  на  поздних  стадиях  онтогенеза  в  регуляцию физиологических процессов могут вовлекаться гормональные сигналы и, прежде всего, этилен. Как показали наши, исследования эндогенный уровень этилена в растениях  хрустальной  травки  повышался  при  действии  засоления .

Исследование возможной роли этилена как сигнального фактора, ответственного за  накопление  кадаверина,  показало  индукцию  этиленом  аккумуляции кадаверина.  Специфичность  индуцирующего  действия  этилена  была подтверждена  тем  фактом,  что  в  тех  же  опытах  экзогенный  этилен  снижал  в листьях содержание спермидина .

Исследование  возможных механизмов  передачи  этиленового  сигнала для образования  этого  диамина  показало,  что  этилен-индуцирующее  образование кадаверина связано  с функционированием  сигнальной  цепи этилена с участием процессов фосфорилирования/дефосфорилирования белков .

Выяснение  физиологической роли  кадаверина  показало,  что  накопление кадаверина на поздних стадиях развития хрустальной травки не было связано с индукцией  САМ-типа.  фотосинтеза.  Таким  образом,  впервые  представлены доказательства того,  что  аккумуляция в листьях взрослых растений хрустальной травки  кадаверина  и  этилена  не  имеют  отношения  к  регуляции  экспрессии стресс-индуцибельного  гена  ФЕПК  (Ppcl)  на  уровне  соответствующей  мРНК .

Обнаруженная  нами  активация  этиленом  процессов фосфорилирования/дефосфорилирования  белков  в  связи  со  стрессиндуцированной  и  этилен-зависимой  аккумуляцией  и  межорганной транслокацией  кадаверина  могла  указывать  на  вовлечение  кадаверина  в регуляцию  активности  ФЕПК  на  пострансляционном  уровне.  Нельзя  также исключать, что выраженные суточные колебания кадаверина в листьях и корнях хрустальной  травки,  показанные  в  наших  опытах,  направлены  на  ослабление регуляции  активности  ФЕПК  малатом  и  аспартатом  -  аллостерическими ингибиторами  фермента  (Izui  et  al.,  2004),  а  также  обусловлены  действием кадаверина как высокопротонированного соединения на рН-стат цитоплазмы. В этом предположении мы опирались на хорошо известную роль полиаминов как регуляторов  клеточной  рН  при  кислотном  стрессе  (Galston  et  al.,  1997)  и аккумуляцию  полиаминов  семьи  путресцина  в  ответ  на  выход  малата  в цитоплазму у  представителя толстянковых (Kalanchoe  и Bryophyllum)  (Morrel  et al., 1980) .

Другим  аспектом  физиологической  роли  аккумуляции  кадаверина  в условиях  засоления  может  быть  его  влияние  на  регуляцию  роста  клеток растяжением.  Известно,  что  выживание  растений  и  в  том  числе  галофитов  в условиях  засоления  сопровождается  снижением  ростовой  активности, включающей  клеточное  растяжение,  что  позволяет  поддерживать  в  растениях необходимый  энергетический  баланс для  формирования  механизмов  адаптации как  на  уровне  стресс-реакции  так  и  в  период  долговременного  действия засоления. Опыты по влиянию различных концентраций кадаверина и этилена на процесс растяжения гипокотилей проростков хрустальной травки показали,  что кадаверин  в  низких  концентрациях  способен  поддерживать  рост  клеток растяжением,  а  при  высоких  -  оказывает  ингибирующий  эффект,  тормозя накопление  биомассы,  но  ускоряя  развитие  репродукционных  процессов подобно засолению .

ВЫВОДЫ

1.  У  растений  хрустальной  травки  в  норме  кадаверин  обнаружен  у онтогенетически  взрослых  растений  на  фоне  пониженного  содержания спермидина,  доминирующего  у  молодых  растений.  Аккумуляция кадаверина в условиях засоления заметно усиливается и также приурочена к позднему периоду онтогенетического развития растений,  совпадающего с  формированием  у  хрустальной  травки  САМ-типа  фотосинтеза.  В противоположность  кадаверину,  аккумуляция  спермина,  завершающего цепь  превращения  путресцина,  в  присутствии  NaCl  стабильно проявлялось  как  у  молодых,  так  и  взрослых  растений,  что  могло  быть связано с его ролью как защитного фактора .

2.  NaCl-индуцированная  аккумуляция  кадаверина  у  хрустальной  травки сопровождалась  повышением  уровня  в  листьях  эндогенного  этилена,  а экспозиция  изолированных  листьев  в  присутствии  предшественника этилена,  АЦК,  повышала  в  них  активность  ЛДК,  на  основании  чего предположили,  что  этилен  у  хрустальной  травки  в  условиях  засоления может выступать в роли сигнального фактора .

3.  Приведены  экспериментальные  доказательства  того,  что  этилениндуцируемое  образование  кадаверина  может  быть  связано  с функционированием  сигнальной  цепи  этилена  с  участием  процессов фосфорилирования/дефосфорилирования белков, что показано с помощью применения  ингибиторов  отдельных  компонентов  цепи  транедукции (Na3VO4, NaF и апигенин) .

4.  Подтвержден  реципрокный  тип  взаимодействия  этилена  и доминирующего  у  хрустальной  травки  полиамина  спермидина .

Установлено,  что  ингибитор  мембранных  фосфатаз  NaF  снимает ингибирующий  эффект этилена  на  образование  спермидина,  что  может указывать на участие процесса фосфорилирования белков .

5.  Впервые  представлены  экспериментальные  доказательства  с  помощью оценки уровня мРНК гена (Ррс 1) ключевого фермента САМ-метаболизма ФЕПКазы  методом  ОТ-ПЦР,  что  аккумуляция  в  листьях  взрослых растений хрустальной травки кадаверина и этилена не имеет отношения к регуляции экспрессии стресс-индуцибельного гена ФЕПК .

6.  Обнаруженная  нами  активация  этиленом  процессов фосфорилирования/дефосфорилирования  белков  в  связи  со  стрессиндуцированной  и  этилен-зависимой  аккумуляцией  и  межорганной транслокацией  кадаверина  может  указывать  на  вовлечение  кадаверина  в регуляцию активности ФЕПК на пострансляционном уровне .

7.  Обнаружены  выраженные  суточные  колебания  кадаверина  в  листьях  и корнях  хрустальной  травки,  которые,  возможно,  направлены  на регуляцию  активности  ФЕПК  аллостерическими  эффекторами  (малат  и аспартат) или рН цитоплазмы .

8.  Физиологическая  значимость  аккумуляции  кадаверина  у  растений хрустальной  травки  в  условиях  засоления  на  поздних  этапах  онтогенеза может состоять также  в  торможении  высокой  концентрацией  кадаверина роста растяжением, позволяющим экономить энергию для формирования долговременных  механизмов  адаптации,  а  также,  благодаря  усиленной окислительной  деградации  диамина  в  апопласте,  способствовать образованию  суберина и лигнина,  снижающих проницаемость клеточной стенки для солей .

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1.  Шевякова  Н.И.,  Шорина  МБ.  Исследование  «тройного  ответа»

проростков  хрустальной  травки  на  кадаверин  и  этилен//Тезисы  Межд .

Конф.  «Актуальные  вопросы экологической  физиологии  растений  в  XXI веке».  Сыктывкар, Республика Коми, Россия,  1-6 октября 2001  г., с.  131Shevyakova  N.I.,  Shorina  M.V.,  Kuznetsov.Vl.V.  The  ethylene  and  the cadaverine  as  a possible  components in the  inter organ chain of stress  signal in plants//International  symposium  "Plant  under  environmental  stress".  Moskow,

2001.Abstracts. P.267-268 .

3.  Kuznetsov  Vl.,  Rakitin  V.,  Shorina  M.,  Stetsenko  L.,  Shevyakova  N.  Protein phosphorylation/dephosphorylation  is  involved  in  ethylene  signal  transduction in  Mesembryanthemum  crystallinum  plants//American  Society  of  Plant Biologist. 2003. P. 234-235 .

–  –  –

5.  Кузнецов Вл.В.,  Шорина М.В., Ракитин В.Ю.,  Стеценко Л.А., Шевякова Н.И.  Этилен-индуцированное  образование  кадаверина  в  листьях хрустальной  травки//Тезисы  V  Съезда  общества  физиологов  растений России  и  Международная  конференция  «Физиология  растений  -  основа фитобиотехнологии». Пенза,  15-21 сентября 2003 г., с.294-295 .

6.  Стеценко Л.А., Шорина М.В., Шевякова Н.И.  Окислительная деградация кадаверина  и  образование  пероксида  водорода  у  Mesembryanthemum crystallinum  L.  в  условиях  засоления/Тезисы  V  Съезда  общества физиологов  растений  России  и  Международная  конференция «Физиология  растений  -  основа  фитобиотехнологии».  Пенза,  15-21 сентября 2003 г., с. 339 .

7.  Шевякова  Н.И.,  Стеценко  Л.А.,  Шорина  М.В.,  Аронова  Е.Е.,  Кузнецов Вл.В.  Механизмы  адаптации Mesembryanthemum  crystallinum  L.  к NaClиндуцированному  оксилительному  стрессу  на  разных  стадиях  развития растения//Тезисы  V  Съезда  общества  физиологов  растений  России  и Международная  конференция  «Физиология  растений  -  основа фитпбиотехнологии». Пенза. 15-21 сентября 2003 г, с. 359-360 .

8.  Шевякова  Н.И.,  Шорина  М.В.,  Ракитин  В.Ю.,  Стеценко  Л.А.,  Кузнецов Вл.В.  Этилен-индуцированное  образование  кадаверина  опосредовано процессами  фосфорилирования/дефосфорилирования  белков//Доклады АН. 2004. Т. 395. №2. С. 283-285 .

9.  Шорина М.В., Рагулин В.В., Кузнецов Вл.В., Шевякова Н.И. Вовлекаются ли кадаверин и этилен в индукцию  САМ-типа  фотосинтеза у хрустальной травки?//Доклады АН. 2005. Т.400. №1. С. 1-3 .

Принято к исполнению 23/03/2005  Заказ № 717 Исполнено 24/03/2005  Тираж:  100 экз. .

–  –  –






Похожие работы:

«Самсонова Наталья Николаевна Клонирование  и  функциональная  характеристика  гена ygjG  из Escherichia  oli  12. cK 03.00.03  - Молекулярная  биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой с...»

«z R \m ?ппп Ha правах рукоппси ВЯТКШ! Александр Иванович РОД К Р А С О Д Н Е В (HE.MEROCALLIS L, BCtJEIlPH 03 00.05 -"Ботаника" АВТОРЕФЕРАТ диссертации, на соискание ученой степени кандидата биологических наук Q \J Новосибирск 2000 Работа выполнена в Центральном сибирском ботаническом саду СО РАН. Научный руководитель: д...»

«ШАБАНОВА Маргарита Михайловна МНОГОЩЕТИНКОВЫЕ  ЧЕРВИ  СЕМЕЙСТВА  POLYNOIDAE (ANNELIDA,  POLYCHAETA).  СИСТЕМА  И  ФИЛОГЕНИЯ. 03.00.08  -  зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации  на  соискание ученой  степени кандидата  биологических  наук М...»

«БЕЛЕВИЧ Ольга Эдуардовна СТРЕКОЗЫ РОДА AESHNA (ODONATA, ANISOPTERA) ПАЛЕАРКТИКИ Специальность  03.00.09 - энтомология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических  наук Новосибирск - 2005 Работа выполнена в лаборатории Экологии насекомых Института с...»

«1С • ггп: МАЛЫШЕВА Зинаида Георгиевна ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ПОДГОТОВКИ СЕМЯН ОРЕХОПЛОДНЫХ ПОРОД к ПОСЕВУ (на примере Ростовской области) П.00.11 Охрана окрз^ающей среды и рациональное использо­ вание природных ресурсов 06.03.01 Лесные культуры, селекция и семеноводство АВТОРЕФЕРАТ диссертации...»

«СИЗОНЕШО ОЛЬГА ЮРЬЕВНА Р Г Б ОД с Ь Ш 2JQ0 СРАВНИТЕЛЬНО-АНАТОМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВТОРИЧНОЙ КСИЛЕМЫ КУСТАРНИКОВ И КУСТАРНИЧКОВ АРКТИЧЕСКОЙ ФЛОРЫ РОССИИ 03.00,05-БОТАНИКА АВТОРЕФЕРАТ диссертахщи на соискание...»

«ЧТЕНИЯ ПАМЯТИ ВЛАДИМИРА ЯКОВЛЕВИЧА ЛЕВАНИДОВА Vladimir Ya. Levanidov's Biennial Memorial Meetings 2003 Вып. 2 ЛИЧИНКИ ПАЛЕАРКТИЧЕСКИХ ВИДОВ РОДА HAPLOPERLA NAVAS (PLECOPTERA, CHLOROPERLIDAE). В.А.Тесленко1, Л.А.Жильцов...»

«Экосистемы. 2016. Вып. 8. С. 59–62 УДК 502.75 ДИНАМИКА ВОЗРАСТНОЙ СТРУКТУРЫ ПРОСТРЕЛА ЛУГОВОГО (PULSATILLA PRATENSIS MILL.) В БАЛАШОВСКОМ РАЙОНЕ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ Шаповалова А. А. Балашовский институт Саратовского национального государственного исследовательского университет...»

«Ископаемые водоросли УДК 551.77:561.26(265.2) В.С. ПУШКАРЬ1,3, М.В. ЧЕРЕПАНОВА2, О.Ю. ЛИХАЧЕВА1 Дальневосточный геологический ин-т ДВО РАН, пр . 100-летия Владивостока, 159, Владивосток 690022, Россия Биолого...»







 
2018 www.lit.i-docx.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.