WWW.LIT.I-DOCX.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - различные публикации
 


Pages:     | 1 | 2 ||

«БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ Кафедра биохимии СТРУКТУРНАЯ БИОХИМИЯ УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ МИНСК УДК 577. 11 (112, 113, 114, 115). 15. 16. ББК в.р. Б Авторы О.И. Губич, ...»

-- [ Страница 3 ] --

Реактивы: жир; 5 % раствор белка; 1 % раствор КОН; 2 % раствор NaHC03; 2 % раствор мыла; желчь .

Ход работы. В шесть пронумерованных пробирок помещают по 3 капли исследуемого раствора и 2-3 мл дистиллированной воды. В первую пробирку добавляют 3-5 капель раствора белка, во вторую – 3-5 капель раствора КОН, в третью – 3-5 капель раствора соды, в четвертую

– 3-5 капель раствора мыла, в пятую – столько же желчи, в шестую (контрольную) - не добавляют ничего. Все пробирки помещают на 5 мин на горячую водяную баню для плавления жира; если жир жидкий, то нагревание излишне. Содержимое всех пробирок взбалтывают, ставят по порядку в штатив и в пяти первых пробирках наблюдают образование относительно устойчивой эмульсии, а в шестой - расслоение неустойчивой эмульсии на жир и воду .

Гидролиз жира (омыление) Реактивы: растительное масло; 40 % раствор КОН .

Ход работы. В пробирку наливают 2 мл растительного масла и добавляют равный объем раствора КОН. Пробирку закрывают пробкой, в которую вставлена стеклянная трубочка (холодильник), помещают в кипящую водяную баню до образования однородного раствора мыла .

Фиксируют результат опыта и записывают уравнение реакции .

Затем в пробирку наливают 8-10 мл воды и взбалтывают .

Полученный раствор (гидролизат) используют для определения составных частей жира .

Открытие в гидролизате составных частей жира Открытие жирных кислот Реактивы: гидролизат; H2SО4 концентрированная .

Ход работы. В пробирку наливают часть гидролизата и добавляют 2-3 капли концентрированной H2SО4. Пробирку опускают в кипящую водяную баню до образования на поверхности жидкости жирного слоя .

Записывают уравнение реакции .

Открытие глицерина Реактивы: гидролизат; 10 % раствор NaOH; 2 % раствора CuSО4 .

Ход работы. В пробирку наливают 2 мл гидролизата, добавляют 8капель раствора NaOH и 2-3 капли раствора CuSО4. Появляется слабосинее окрашивание вследствие образования глицерата меди .

Записывают уравнение реакции .

Открытие ненасыщенных жирных кислот Реактивы: бромная вода; растительное масло .

Ход работы. В две пробирки наливают по 1 мл бромной воды. В одну пробирку добавляют 2-3 капли растительного масла и сильно встряхивают; наблюдают обесцвечивание бромной воды. Вторая пробирка контрольная .

Записывают уравнение реакции .

Получение нерастворимых солей высших жирных кислот Реактивы: раствор мыла; 10 % раствор СаС12 .

Ход работы. В пробирку наливают 1-2 мл раствора мыла (можно использовать гидролизат, полученный при омылении) и прибавляют 3-5 капель раствора СаС12. Тщательно перемешивают и наблюдают появление осадка нерастворимого кальциевого мыла .

Записывают уравнение реакции .

Лабораторноя работа 2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧИСЕЛ ЖИРОВ

Определение йодного числа Ненасыщенность жира зависит от присутствия в его составе непредельных жирных кислот. Ненасыщенные соединения легко присоединяют по два атома галогена по месту каждой двойной связи .

Обычно степень ненасыщенности определяется йодным числом .

Йодное число определяется массой йода, который присоединяется к 100 г жира. Йодное число позволяет судить о степени ненасыщенности жира, о склонности его к «высыханию» и прогорканию .

Реактивы: жиры; этанол; 0,1 н. раствор йода в этаноле; 0,1 н .

раствор Na9S2О3 (гипосульфит натрия); 0,5 % раствор крахмала;

хлороформ .

Ход работы. В одну коническую колбочку на 50 мл вносят 0,1 г жира и 10 мл хлороформа (опыт). В другую – наливают 10 мл хлороформа (контроль). В обе колбочки приливают по 25 мл спиртового раствора йода. Закрывают колбы пробками, тщательно перемешивают и оставляют в темноте на 1,5 ч. Не вступивший в реакцию йод титруют раствором гипосульфита натрия сначала до слабо-желтой окраски, а затем в присутствии крахмала (добавить несколько капель крахмала в колбочку) до обесцвечивания раствора, потом так же титруют контроль .





Расчет йодного числа. 1 мл 0,1 н. раствора Na2S2О3 эквивалентен 1 мл 0,1 н. раствора йода, или 0,0127 г йода. Зная объем 0,1 н.

раствора гипосульфита натрия, который пошел на титрование контроля и опыта, вычисляют йодное число X :

100.0,0127f( А - В ) X = ------------------------------------, с где А и В – объем 0,1 н. раствора Na2S2О3 на титрование соответственно контроля и опыта, мл; f – коэффициент поправки (указан на банке с раствором Na2S2О3); с – навеска жира, г .

Определение числа омыления жира Число омыления – это масса (в миллиграммах) КОН, необходимого для нейтрализации всех свободных и связанных жирных кислот, содержащихся в 1 г жира .

Реактивы: жир; 0,5 н. спиртовой раствор КОН; 0,5 н. раствор НС1;

0,1 % раствор фенолфталеина .

Ход работы. В колбочку на 50 мл вносят 0,5 г жира, прибавляют 15 мл спиртового раствора КОН (опыт), кипятят на водяной бане 50 мин с обратным холодильником, пару раз перемешивая содержимое колбы .

Одновременно ставят контрольный опыт: вместо жира берут 0,5 мл дистиллированной воды .

Окончание омыления определяется по образованию однородной прозрачной жидкости, которую охлаждают до комнатной температуры, добавляют 20 мл дистиллированной воды и титруют 0,5 н. раствором НС1 по фенолфталеину .

Расчет числа омыления. 1 мл 0,5 н. раствора КОН содержит 28 мг КОН. Масса КОН для нейтрализации всех жирных кислот в 1 г жира, т .

е. число омыления Y равно:

28 f (В – А) Y = –––––––––, с где В и А - объем 0,5 н. раствора НС1 на титрование соответственно контроля и опыта, мл; с - навеска жира, г; f – коэффициент поправки (указан на банке с раствором НС1) .

Определение кислотного числа Кислотное число - это масса (в миллиграммах) КОН, необходимого для нейтрализации всех свободных жирных кислот в 1 г жира .

Реактивы: жир; смесь этанола с диэтиловым эфиром; 0,1 н. раствор КОН; 0,1 % раствор фенолфталеина .

Ход работы. Взвешивают 1 г жира, помещают его в колбочку на 50 мл, добавляют 10 мл смеси этанола с диэтиловым эфиром и 3-4 капли фенолфталеина. Раствор жира титруют 0,1 н. раствором КОН до нежнорозового цвета .

Расчет кислотного числа. 1 мл 0,1 н. раствора КОН содержит 5,6 мг

КОН. Кислотное число жира Z определяют по формуле:

5,6А f Z = –––––––––, с где А – объем 0,1 н. раствора КОН на титрование раствора жира; f – коэффициент поправки (указывают на банке с раствором КОН); с – навеска жира, г .

Определение эфирного числа жира Эфирное число - это масса КОН, необходимого для нейтрализации жирных кислот, которые образуются при омылении 1 г жира. Эфирное число рассчитывают как разность между числом омыления и кислотным числом данного жира .

Лабораторная работа 3 .

СТЕРОЛЫ

Под влиянием концентрированной серной кислоты и уксусного ангидрида холестерол превращается в углеводороды с суммарной формулой С54Н86 и C54H88 (бихолестадиены), которые, взаимодействуя с серной кислотой, образуют диеновые кислоты: с двумя молекулами H2S04 – продукт красного цвета (реакция Сальковского), с одной молекулой – продукт зеленого цвета (реакция Либермана – Бурхарда) .

Реакция Сальковского Реакция Сальковского – это реакция дегидратации молекулы холестерола под действием концентрированной серной кислоты с образованием холестеролена, имеющего красную окраску:

–  –  –

Реактивы: 1 % раствор холестерола в хлороформе; H2SО4 концентрированная .

Ход работы. В сухую пробирку помещают 10 капель раствора холестерола и добавляют (осторожно по стенке пробирки) равный объем концентрированной H2SО4. При легком встряхивании на границе раздела двух жидкостей образуется кольцо оранжевого цвета, при стоянии окрашивающееся в красный. Нижний слой H2S04 приобретает зеленую окраску .

Реакция Либермана — Бурхарда Реактивы: 1 % раствор холестерола в хлороформе; уксусный ангидрид; H2SО4 концентрированная .

Ход работы. В сухую пробирку наливают 10 капель раствора холестерола, добавляют 3-5 капель уксусного ангидрида и 1-2 капли концентрированной H2SО4. Содержимое пробирки осторожно встряхивают и помещают на 1-2 мин на водяную баню при температуре 40 °С или оставляют при комнатной температуре на 5-10 мин. В присутствии холестерола вначале появляется красное окрашивание, которое постепенно переходит в фиолетовое синее зеленое. При малом содержании холестерола в растворе сразу появляется зеленое окрашивание .

Количественное определение холестерола основано на цветной реакции Либермана – Бурхарда .

Реактивы: реактив Либермана – Бурхарда; стандартный раствор холестерола (100 мг холестерола в 100 мл хлороформа); сыворотка крови; хлороформ .

Ход работы. В пробирку (опытная проба) налить 1,5 мл реактива Либермана - Бурхарда, затем осторожно по стенке пробирки добавить 0,2 мл сыворотки крови и 0,3 мл хлороформа. Содержимое пробирки энергично встряхнуть. Пробу оставить на 20 мин для развития окраски .

В другую пробирку (контрольная проба) налить 1,5 мл реактива Либермана – Бурхарда и 0,5 мл хлороформа .

Измерить на ФЭКе интенсивность зеленого окрашивания опытной пробы против контрольной пробы при X = 630-690 нм (красный светофильтр) в кювете 0,5 см .

Построение калибровочного графика. В каждую из пяти пронумерованных пробирок внести стандартный раствор холестерола в объемах, указанных в табл. 5, затем добавить хлороформ и по 1,5 мл реактива Либермана - Бурхарда. Содержимое пробирок встряхнуть .

Через 20 мин измерить экстинкцию на ФЭКе против контрольной пробы .

–  –  –

На основании полученных результатов построить калибровочный график на миллиметровой бумаге. По калибровочному графику найти содержание холестерола в опытной пробе (0,2 мл сыворотки крови) .

Произвести пересчет количества холестерола на 1 л сыворотки крови .

–  –  –

Получение фосфатидилхолинов из яичного желтка Реактивы: яичный желток; ледяная СН3СООН; ацетон; 10 % раствор NaOH; насыщенный раствор CdCl2; 10 % раствор НС1;

кристаллические KHSО4, Na2CО3, KNО3; 10 % раствор HNО3;

молибденовый реактив; этанол .

Ход работы. Помещают в стаканчик приблизительно 1/5 ч. одного куриного желтка и добавляют при перемешивании 10-15 мл горячего этанола. Смесь охлаждают и фильтруют в сухую пробирку. Если фильтрат мутнеет, то фильтрование повторяют до получения прозрачного раствора .

Осаждение фосфатидилхолинов ацетоном Ход работы. В пробирку наливают 2-3 мл ацетона и по каплям приливают 1-2 мл полученного фильтрата. Наблюдают появление мути, что указывает на выпадение фосфатидилхолинов, которые в ацетоне нерастворимы .

Осаждение фосфатидилхолинов хлоридом кадмия(II) При добавлении раствора CdCl2 к спиртовому раствору фосфатидилхолинов выпадает осадок. Образуется малорастворимое соединение, в котором на 3 ч. фосфатидилхолинов приходится 4 ч .

хлорида кадмия .

Ход работы. В сухую пробирку наливают 5 капель спиртового раствора фосфатидилхолинов и добавляют 1-2 капли насыщенного раствора CdCl2; выпадает осадок .

Эмульгирование фосфатидилхолинов Ход работы. К 2-3 мл фильтрата по каплям добавляют дистиллированную воду. Наблюдают образование устойчивой эмульсии фосфатидилхолинов .

Гидролиз фосфатидилхолинов Ход работы. К оставшемуся фильтрату добавляют 3-5 мл раствора NaOH и кипятят 5-10 мин. Происходит гидролитический распад фосфатидилхолинов с отщеплением холина, образованием жирных кислот и глицерофосфата. При нагревании ощущается запах селедочного рассола и происходит посинение лакмусовой бумажки, характерное для триметиламина, образующегося из холина. В растворе устанавливают присутствие жирных кислот, глицерола, фосфорной кислоты .

•Определение жирных кислот. Полученный после гидролиза раствор разбавляют 2-3 мл дистиллированной воды и подкисляют раствором НС1, при этом выпадает осадок свободных жирных кислот .

Осадок отфильтровывают, фильтрат нейтрализуют раствором NaOH (по лакмусу) и выпаривают на водяной бане досуха .

•Открытие глицерола. В части сухого остатка определяют присутствие глицерола (см. лабораторную работу 1; акролеиновая проба) .

•Открытие фосфорной кислоты. Часть сухого остатка переносят в фарфоровый тигель и тщательно смешивают с двух- или трехкратным количеством смеси, состоящей из 2 ч. Na2CО3 и 1 ч. KNО3. Тигель накрывают крышкой и осторожно нагревают. Реакция идет бурно, иногда она сопровождается небольшой вспышкой. Сплав осторожно прокаливают до полного окисления. После охлаждения тигля сероватобурую золу растворяют в HNО3 (кислоту добавлять по каплям, растирая золу палочкой), в полученном растворе обнаруживают фосфорную кислоту: к 2 мл молибденового реактива аккуратно прибавляют исследуемый раствор. Смесь нагревают. Образуется желтый осадок (см .

тему 4; открытие фосфорной кислоты) .

Результаты опытов и объяснения записывают .

ТЕСТЫ, УПРАЖНЕНИЯ, ЗАДАЧИ

1. Ацилглицерины – природные органические соединения:

А. хорошо растворимые в воде;

Б. хорошо растворимые в трихлорметане;

В. нерастворимые в бензоле;

Г. хорошо растворимые в этаноле .

2. В каких липидах жирная кислота присоединена сложноэфирной связью: 1) фосфатидилглицеролах; 2) сфингомиелинах; 3) цереброзидах;

4) плазмалогенах; 5) стеридах ?

А. 1,2,3,4,5. Б. 1,2,4,5. В. 2,3,5. Г. 1,4,5. Д. 2,3,4 .

3. При участии катализатора, например никеля, можно гидрогенизировать:

1) 1-пальмитоил-2-линоленоил-3-стеарилглицерол; 2) 1-пальмитоилдистеароилглицерол; 3) 1,2-дипальмитоил-3-миристоилглицерол; 4) 1-пальмитоолеил-2-линолеил-3-олеилглицерол; 5) 1,2,3тристероилглицерол .

А. 1,3,4. Б. 1,4. В. 2,3. Г. 3,5. Д. 2,4,5 .

4. К воскам относятся сложные эфиры высших жирных кислот и:

1) диатомных спиртов жирного ряда; 2) пропандиола; 3) стероидов;

4) глицерол-3-фосфата; 5) орнитина; 6) одноатомных спиртов жирного ряда .

А. Только 6. Б. Только 1 и 3. В. 1,3,6. Г. 1,3,4. Д. 2,5,6 .

5. К фосфохолиновым производным церамидов относятся:

А. цереброзиды;

Б. сульфогалактоцерамиды;

В. сфингомиелины;

Г. олигогликоцерамиды .

6. Насыщенные жирные кислоты могут входить в состав: 1) сфингомиелинов; 2) стеролов; 3) эйкозаноидов; 4) восков; 5) желчных кислот; 6) глицерофосфолипидов; 7) терпегов; 8) гликолипидов:

А. 1,2,4,5,6,8. Б. 1,4,5,6,7,8. В. 1,3,4,6,7. Г. 1,4,6,8 .

Д. 2,4,5,6,8 .

7. Сопряженные двойные связи –СН=СН–СН=СН– А. встречаются в жирных кислотах растительного происхождения .

Б. встречаются в жирных кислотах животного происхождения .

В. не встречаются в жирных кислотах естественного происхождения .

Г. имеются в арахидоновой кислоте .

Д. имеются в линолевой и линоленовой кислотах .

8. Фосфатидная кислота является производным глицерола, содержащим:

А. два остатка жирных кислот и фосфоэтаноламин;

Б. остатки жирной кислоты, непредельного одноатомного спирта и фосфорной кислоты;

В. два остатка жирной кислоты и остаток фосфорной кислоты;

Г. два остатка жирной кислоты и остаток диацилглицерофосфата .

9. В молекуле фосфатидилсерина гидрофильной частью являются:

А. остатки жирных кислот;

Б. остатки фосфорной кислоты и серина;

В. остатки жирных кислот и серина;

Г. остатки жирных кислот, глицерола и серина .

10. Регуляторными функциями в организме обладают:

А. фосфатидилэтаноламины;

Б. простагландины;

В. воски;

Г. соли жирных кислот;

Д. сфингофосфолипиды .

11. В пище человека должны присутствовать заменимые и незаменимые жирные кислоты. Какие жиры бедны, например линолевой и линоленовой кислотами: а) рыбий жир; б) свиной жир; в) говяжий жир; г) подсолнечное масло; д) льняное масло?

А. а, б, в. Б. б, в, д. В. а, г, д. Г. а, б, д. Д. б, в .

12. В эндокринных железах и клетках других органов вырабатываются специфические липидные регуляторные факторы, участвующие в проявлении болевых и воспалительных реакций, регуляции секреции желудочного и панкреатического сока, поддержании гомеостазиса, оказывающие транквилизирующее действие. К какой группе липидов они относятся?

–  –  –

13. Выберите верные в отношении липидов утверждения .

1) В маслах, как правило, присутствует больше ненасыщенных жирных кислот, чем насыщенных .

2) К стероидам относятся гормоны коры надпочечников .

3) Ацилглицерины рыб, обитающих в теплых экваториальных водах, содержат больше ненасыщенных жирных кислот, чем рыб арктических морей .

4) Многие липиды при окислении дают в среднем в два раза больше энергии, чем белки .

5) Липиды подкожной жировой клетчатки выполняют функцию теплоизоляции, так как обладают высокой теплопроводностью .

6) Температура плавления липидов тем ниже, чем выше в них доля насыщенных жирных кислот .

А. 1,2,4. Б. 1,2,5,6. В. 3,4,6. Г. 1,2,4,5. Д. 1,2,3,4,5 .

14. Какие признаки из перечисленных относятся к характеристике:

1) ацилглицеролов; 2) фосфатидилглицеролов; 3) сфингомиелинов :

а) входят в состав биологических мембран;

б) содержат остатки жирных кислот;

в) являются производными двухатомного аминоспирта;

г) содержат остаток фосфорной кислоты;

д) относятся к омыляемым липидам;

е) составляют основную массу растительных масел и животных жиров;

ж) являются производными 1,2-диацилглицеро-3фосфата;

з) обладают амфифильными свойствами .

–  –  –

15. Какие из приведенных ниже признаков указывают на возможную принадлежность липида к стероидам:

1) в основе строения лежит сквален;

2) является производными пергидрофенантренциклопентана;

3) в положении 3 стерана содержит кислородсодержащий заместитель;

4) в положениях 10,13,17 стерана может содержать остатки высших жирных кислот;

5) состоит из изопреновых единиц, образующих бициклическую структуру?

А. 2,3,5. Б. 1,4,5. В. 1,3,4. Г. 2,3. Д. 2,3,4 .

16. Выберите виды химических связей, участвующих в образовании фосфатидилхолинов: 1) ковалентные; 2) водородные; 3) фосфоэфирные;

4) простые эфирные; 5) бисульфидные; 6) ациламидные .

А. 1,2,3. Б. 3,4,6. В. 1,3,4. Г. 1,2,5,6. Д. 2,3,5,6 .

17. Дайте ответ в форме АБ; А=Б; А Б

1. А. Температура плавления ацилглицеролов, содержащих полиеновые жирные кислоты. Б. Температура плавления ацилглицеролов, содержащих насыщенные жирные кислоты .

2. А. Ионное число пальмитолеиновой кислоты .

Б. Иодное число линолевой кислоты .

3. А. Количество остатков жирных кислот в цереброзидах .

Б. Количество остатков жирных кислот в сфингомиелинах .

4. А. Детергентная активность фосфатидилэтаноламина .

Б. Детергентная активность лизофосфатидилэтаноламина .

5. А. Количество двойных связей в молекуле простагландина ПГД3 .

Б. Количество двойных связей в молекуле простагландина ПГF2 .

6. А. Содержание изопреновых группировок в молекуле гутты .

Б. Содержание изопреновых группировок в молекуле сквалена .

7. А. Количество остатков глицерола в молекуле кардиолипина .

Б. Количество остатков глицерола в молекуле плазменилсерина .

18. В семь пронумерованных пробирок внесли по 500 мг сульфата магния, затем в 1-ю пробирку добавили 100 мг растительного масла, во 2ю – 100 мг воска, в 3-ю – 100 мг холестерола, в 4-ю – 10 капель воды, в 5ю – 100 мг глицерола, в 6-ю – 100 мг каучука, в 7-ю – 100 мг кардиолипина. Пробирки осторожно, но сильно нагрели. Из каких пробирок начнут выделяться белые густые пары, обладающие резким раздражающим запахом кухонного чада из-за образования непредельного акрилового альдегида – акролеина?

А. 1,3,6,7. Б. 2,5. В. 2,4. Г. 1,5,6. Д. 1,2,5. Ж. 1,5,7 .

19. Расставьте жирные кислоты в порядке увеличения количества двойных связей: 1) арахидоновая; 2) линолевая; 3) нервоновая; 4) линоленовая .

А. 3,2,4,1. Б. 4,2,3,1. В. 3,4,2,1. Г. 1,2,3,4. Д. 3,2,4,1 .

20. Наличие гидрофобной части, наряду с гидрофильной, – обязательное условие функционирования липидов в составе биологических мембран. Какие структуры из перечисленных обладают гидрофобными свойствами у мембранных липидов:

1) пергидрофенантренциклопентановое ядро стеролов;

2) остаток глицерола, соединяющий два остатка фосфатидной кислоты в кардиолипинах;

3) нефосфорилированный в 3,4-положениях инозитол в составе фосфатидилинозитолов;

4) остаток непредельной жирной кислоты, находящейся во втором (-) положении фосфатидилэтаноламина;

5) полипренильная часть долихолфосфатсахаров;

6) остаток пальмитиновой кислоты в -положении у ацилглицеролов;

7) остаток высшего моноатомного спирта в составе воска?

А. Только 1,4,5. Б. Только 1,2,5,6. В. Только 1,4,5,6,7 .

Г. Все перечисленные. Д. Все, кроме 1,2 .

21. Известно, что из-за плохой растворимости в воде липиды способны образовывать эмульсии с бифильными молекулами. Какие вещества (соединения) могут выступать в качестве эффективных эмульгаторов ацилглицеринов: 1) KOH ~1 % раствор; 2) мыло ~ 2 % раствор; 3) белок ~ 5 % раствор; 4) желчь?

А. Только 2. Б. Только 2,4. В. Только 1,2,3. Г. 1,2,3,4. Д. Только 2,3,4 .

22. Присутствие ненасыщенных жирных кислот в составе жира можно определить:

А. добавив к бромной воде (~ 1 мл) несколько капель растительного масла;

Б. добавив к растительному маслу (~ 1 мл) 2-3 капли концентрированной H2SO4;

В. добавив к растительному маслу (~ 1 мл) несколько капель щелочного раствора CuSO4;

Г. добавив к растительному маслу (~ 1 мл) по несколько капель уксусного ангидрида и концентрированной H2SO4 .

23. Рассчитайте процентное содержание холина в фосфатидилхолине, (включающем остатки олеиновой и пальмитиновой кислот), цитидиндифосфохолине и ацетилхолине .

24. Для определения общего количества липидов в семенах используют метод извлечения их хлороформ-метанольной смесью .

Параллельно с извлечением липидов в семенах определяют содержание воды, т.к. она тоже извлекается этой смесью и может быть принята за масло. Рассчитайте содержание липидов в процентах (на абсолютно сухое вещество) в семенах редьки, если в анализ взяли 37,5 г воздушносухих семян с содержанием воды в них 4,5 %, а выход абсолютно сухого вещества после экстракции составил 13,5 г .

25. На титрование растворенной в этаноле 10 мг монокарбоновой кислоты израсходовано 3,5 мл 0,01 н. спиртового раствора NaOH .

Рассчитайте молекулярную массу кислоты .

26. Рассчитайте йодное число масла, если известно, что его навеска составила 0,1875 г, на титрование контрольной пробы было израсходовано 5,8 мл 0,1 н. раствора гипосульфита и 1,9 мл – опытной .

27. Рассчитайте кислотное число жира, если его навеска составила 300 мг, а на титрование было затрачено 1,3 мл 0,1 н. раствора KOH .

28. Методика расчета содержания галактоцереброзидов в тканях основана на определении количества галактозы по цветной реакции с орцином в определенном объеме гидролизата, полученного при обработке очищенного тканевого экстракта. Расчет процентного содержания ведут по формуле:

x. 4,55. V. V2. 100 с = –––––––––––––––––––––, V1. V3. а. 1000

где х – количество галактозы, найденное по калибровочной кривой, в пробе (мкг);

4,55 - коэффициент для пересчета содржания цереброзидов исходя из определения содержания в них галактозы (22,2%);

V – общий объем экстракта (мл);

V1 – объем экстракта, взятого для гидролиза (мл);

V2 – общий объем гидролизата (мл);

V3 – объем гидролизата, взятого для цветной реакции;

а – навеска сухой ткани (мг);

100 – коэффициент для расчета содержания цереброзидов в процентах;

1000 – коэффициент для перевода микрограммов в миллиграммы .

Рассчитайте содержание цереброзидов в мозге кролика в процентах и в мкг/кг ткани, если экстинкция (Е) в пробе против контроля составила 0,076, что в пересчете по калибровочной кривой равно 18 мкг; для гидролиза взято 4 мл хлороформного экстракта из 150 мл полного количества экстракта, а для цветной реакции – 2 мл из 10 мл гидролизата;

навеска ткани – 150 мг .

29. Напишите структурную формулу продукта, образующегося в результате дегидратации молекулы холестерола под действием концентрированной H2SO4. Какое вещество будет обладать амфифильными свойствами холестерол или продукт его дегидратации?

30. Из скелетной мышцы крысы с помощью экстрагирования метанол-хлороформенной смесью выделили общую фракцию липидов .

Затем методом тонкослойной хроматографии провели разделение фракции липидов в смеси растворителей, состоящей из гексана – диэтилового эфира – уксусной кислоты (73:25:2). Разделение проводили в течение 50 мин. при комнатной температуре. Далее пластинку высушили на воздухе и проявили хроматограмму, опрыскав пластинку из пульверизатора 10 % спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты и поместив ее в термостат на 5 мин. при 100 оС. На желтом фоне пластинки отчетливо проявились семь пятен, окрашенных в синий цвет, как схематически представлено на рисунке .

Параллельно с разделением общей фракции липидов провели хроматографическое разделение свидетелей и рассчитали их Rf .

Rf свидетелей, приведены в таблице .

–  –  –

СПИСОК ОБОЗНАЧЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ

В БИОХИМИЧЕСКОЙ ЛИТЕРАТУРЕ

Тпл – температура плавления, К Ткип – температура кипения, К Тразл – температура разложения, К tзам – температура замерзания, оС tкип – температура кипения, оС tпл – температура плавления, оС tразл – температура разложения, оС КоQ10 – коэнзим Q10 (убихинон)

– коэффициент молярной экстинкции в максимуме maxс поглощения min – коэффициент молярной экстинкции в минимуме поглощения

– коэффициент молярной экстинкции при длине волны C – молярная концентрация Ео – стандартный окислительно-восстановительный потенциял, В Еа – энергия активации, ккал/моль F – изменение свободной энергии, ккал/моль G – изменение свободной энергии при температуре 25оС и рН 7, ккал/моль I – ингибитор, ингибирование Мr – относительная молекулярная масса S – константа седиментации в воде при температуре 20оС Vmax – максимальная скорость ферментативной реакции (в условиях насыщения фермента субстратом)

ОСНОВНЫЕ ЕДИНИЦЫ ИЗМЕРЕНИЯ,

ПРОИЗВОДНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ И КОНСТАНТЫ

–  –  –

Растворы – это однородные (гомогенные) системы, состоящие из двух и более компонентов (составных частей) и продуктов их взаимодействия .

По точности выражения содержания вещества растворы делят на неточные (приблизительные) и точные .

Неточные растворы. Численным выражением состава приблизительных растворов в соответствии с Международной системой единиц (SI) является массовая доля растворенного вещества – безразмерная физическая величина, равная отношению массы растворенного вещества к общей массе раствора. На практике также применяют численное выражение состава раствора в виде массовообъемных отношений его компонентов .

Для получения более полного представления о приготовлении приблизительных растворов обратимся к рассмотрению наиболее часто используемых их аналогов, объединяемых термином «процентное содержание» .

Под процентным содержанием принято понимать определенную массу или объем вещества (г или мл соответственно), содержащихся в 100 г или 100 мл раствора. Это общее определение понятия процентного содержания включает несколько разновидностей. В зависимости от единиц (объема или массы), используемых для обозначения, различают массовое (весовое), массо-объемное (весо-объемное), объемное, объемно-массовое (объемно-весовое) процентные содержания .

Массовое (весовое) процентное содержание (%) показывает сколько граммов вещества содержится в 100 г раствора и вычесляется по формуле:

% = а/(а + б), где а – массовая доля растворенного вещества, б – количество растворителя в граммах (в сумме составляют 100 г) .

Например, 20%-ным раствором NaCl называют такой раствор, в 100 г которого содержится 20 г NaCl и 80 г воды. Для получения раствора этого вида процентного содержания навеску вещества вносят в химический стакан, в который затем вливают 80 мл воды (при комнатной температуре масса 1 мл воды составляет примерно 1 г) .

Массо-объемное (весо-объемное) процентное содержание (г%) представляет собой отношение массовой доли растворенного вещества в граммах к 100 мл раствора. Размерность этого вида процентного содержания – г/мл (масса/объем). Например, 20 г%-ный раствор NaCl содержит 20 г соли в 100 мл раствора. Для его получения навеску соли (20 г) вносят в мерный цилиндр или мензурку и доливают водой до метки. В случае водных растворов численно одинаковые массовые и массово-объемные процентные растворы по массовой доле вещества в единице объема различаются не очень сильно, ими можно пренебречь .

Однако при использовании неводных растворов различия по массовой доле вещества в единице объема могут быть весьма значительными. Так, в 10 г%-ном растворе жира в тетрахлорметане (жидкости плотностью 1,6 кг/л) на 10 г жира приходится около 90 мл растворителя, тогда как в 10% растворе значительно меньше – 56 мл .

Объемное процентное содержание (об%, или о – градус) есть отношение объемной доли (мл) вещества к 100 мл раствора. Размерность объемного процентного содержания – мл/мл (объем/объем). Например, 20 об%-ный (20°) раствор этилового спирта содержит 20 мл абсолютного (безводного) спирта и 80 мл воды. Следует иметь в виду, что при смешивании разных жидкостей, бесконечно растворяющихся друг в друге (как, например, в случае спирта и воды), в силу явления контракции (т. е. взаимного проникновения молекул одного вещества через промежутки между молекулами другого) конечный объем раствора может составлять менее 100 мл .

Объемно-массовое (объемно-весовое) процентное содержание отражает объемную долю (мл) вещества, содержащуюся в 100 г раствора .

В лабораторной практике используется редко .

Приготовление процентных растворов из кристаллогидратов:

1-й способ (точный). Предварительно рассчитывают массовое (весовое) количество кристаллогидрата, в котором содержится заданное количество вещества. Пусть, например, требуется приготовить 5%-ный раствор CuSO4 из кристаллогидрата (CuSO4 • 5H2O) этого вещества. Для расчета необходимой его навески исходят из того, что на одну молекулу CuSO4 приходится пять молекул воды – относительная молекулярная масса (Mr) H2O = 18, а Mr CuSO4 • 5H2O составляет 245 (155 приходится на чистую соль и 90 (18 • 5) – на воду). Путем решения пропорции:

245 г CuSO4 • 5H2O содержит 155 г CuSO4 х г CuSO4 • H2O – 5 г CuSO4 находят требуемую навеску кристаллогидрата (х):

х = 5 • 245/155 = 7,9 г На этикетке бутыли, в которой хранится такой раствор, должно быть написано: «5%-ный (или 5 г%) раствор CuSO4». Это значит, что в 100 г (или 100 мл) раствора содержится 5 г CuSO4, а не его кристаллогидрата .

2-й способ (условный). Часто, готовя процентные растворы, ведут расчет исходя из массы кристаллогидрата. Например, для приготовления 5%-ного раствора отвешивают 5 г CuSO4 • 5H2O и приливают к этому количеству воду до объема 100 мл. По существу такой раствор не является 5%-ным. На этикетке сосуда, в котором он хранится, должна быть надпись:

5%-ный (или 5 г%) раствор CuSO4 • 5 H2O .

Следует иметь в виду, что неправильное хранение кристаллогидратов (в частности, из-за плохой герметичности посуды) может приводить к постепенному выходу кристаллизационной воды из кристаллической решетки (выветривание). При этом часть вещества, особенно на поверхности кристаллов, переходит в аморфное состояние .

Такой реактив не пригоден для приготовления растворов ни первым, ни вторым способом. В данном случае требуется предварительно перекристаллизовать его (т. е. восстановить кристаллическую структуру реагента) или, если это позволяют химические свойства вещества, прокалить, переведя его таким образом в аморфное состояние .

Поскольку в соответствии с требованиями СИ в качестве единицы массы и объема раствора используют «кг» и «л», то для приготовления таких растворов сразу производят расчет массовой или объемной доли растворенного вещества на кг или л раствора (размерность таких растворов будет г(кг)/кг, г(кг)/л или мл(л)/л соответственно) или значения отдельных видов процентного содержания умножают на 10, при этом массовое (весовое) и объемное процентное содержание преобразуются в массовое и объемное отношение с размерностью г(кг)/кг и мл(л)/л соответственно, а массо-объемное (весо-объемное) процентное содержание – в массовое содержание с размерностью г(кг)/л .

Для приготовления неточных растворов используются аптекарские, технические (техно-химические) весы и мерная посуда (цилиндры, мензурки) .

В случае если возникает потребность в получении приблизительных растворов путем разбавления более концентрированных, можно воспользоваться простым и быстрым способом, определяемым правилом «креста» .

Пусть необходимо разбавить 20%-ный (200 г/л) раствор NaCl до 5%-ного (50 г/л).

Составляют первую запись:

где 20 — показатель массовой доли вещества во взятом растворе; 5 — показатель требуемого содержания массовой доли; 0 — вода .

Из 20 вычитают 5 и полученное значение записывают в правом нижнем углу. Из 5 вычитают 0 и записывают цифру в правом верхнем углу.

После этого схема принимает вид:

Это означает, что для получения 5%-ного раствора нужно 5 объемов 20%-ного раствора смешать с 15 объемами воды .

Если смешивать два исходных раствора одного и того же вещества для получения раствора промежуточной концентрации, то из схемы устраняется «0». Пусть смешиванием 35%-ного и 15%-ного растворов требуется приготовить 25%-ный.

В этом случае схема примет вид:

Следовательно, для приготовления 25%-ного раствора нужно взять по 10 объемов обоих исходных растворов. Приведенными схемами можно пользоваться только тогда, когда не требуется достижения особой точности приготовления растворов .

Точные растворы. Численным выражением состава точных растворов в соответствии с СИ является молярная концентрация (с – моль/л). Молярная концентрация или молярность – это величина, равная отношению количества растворенного вещества к объему раствора .

Раствор, в 1 л которого содержится 1 моль растворенного вещества, называется молярным. Например, 1 моль/л раствор NaОН содержит в 1 л 1 моль • 40 (относительная молекулярная масса) = 40 г NaОН; 0,01 моль/л раствор NaОН содержит в 1 л 0,01 моль • 40 = 0,4 г NaОН и т. д .

Чтобы приготовить, например, децимолярный раствор NaОН, надо отвесить его 4 г, внести в литровую мерную колбу, на горлышке которой отмечен объем, точно равный 1 л, добавить дистиллированной воды до полного растворения вещества и затем раствор довести до метки (нижняя часть мениска должна касаться метки) .

Пользоваться молярной концентрацией удобно, так как известно количество вещества, содержащееся в определенном объеме раствора .

Например, для нейтрализации 1 л 1 моль/л раствора NaОН необходимы в соответствии с уравнениями реакций:

NaОН + НС1 = NaС1 + Н2О;

2NaОН + Н2SO4 = Na2S04 + 2Н2О следующие объемы растворов кислот: 1 л 1 моль/л раствора НС1 или 0,5 л 1 моль/л раствора Н2SO4. Очевидно, на нейтрализацию 0,5 л 2 моль/л раствора NaОН потребуется 0,5 л 2 моль/л раствора НС1, или 0,5 л 1 моль/л раствора Н2SO4, или 0,25 л 2 моль/л раствора Н2SO4 и т. д .

Для получения растворов точной концентрации применяют исходные вещества (т. е. реактивы квалификации «х. ч.», строго отвечающие своей химической формуле), фиксаналы, точную мерную посуду и весы для очень точного взвешивания (аналитические, полумикрохимические, микрохимические). Поскольку не всегда удается получить точный раствор нужной концентрации путем растворения приготовленной навески вещества или содержимого некоторых фиксаналов, его приходится проверять путем титрования, находить коэффициент поправки и при необходимости исправлять .

ПРИГОТОВЛЕНИЕ НЕКОТОРЫХ РЕАКТИВОВ

1. Ацетилхолин, 2%-ный нейтральный раствор. Готовят 2%-ный раствор ацетилхолинхлорида или бромида и нейтрализуют его 0,005 н раствором NaOH до рН 8,1 .

2. Бензидин, 0,1%-ный раствор. 50 мг солянокислого бензидина растворяют в мерной колбе емкостью 50 мл примерно в 35–40 мл ацетатного буфера при нагревании до 70–80 оС в водяной бане .

После растворения охлаждают до комнатной температуры и доводят объем до метки ацетатным буфером. Раствор фильтруют в темную склянку и хранят не более 7 дней, не охлаждая его ниже 16оС, так как бензидин может выпасть в виде кристаллов. Если раствор желтеет, то он непригоден .

3. Гипосульфит, 0,005 н раствор. Для приготовления 0,005 н раствора йодноватокислого калия отвешивают 0,3567 г KIO3 и растворяют в мерной колбе на 2 л бидистиллированной водой, которую приливают до метки. Каждый раствор проверяют по титрованному раствору KIO3. Проверку титра раствора гипосульфита калия производят, отмеривая в колбочку 2 мл раствора йодноватокислого калия, прибавляя 2 мл 3%-ного раствора тройного хлорцинкйодистого калия, 2 капли раствора крахмала и титруя выделившийся йод раствором гипосульфита из микробюретки .

4. Глюкоза, 1 мг/мл стандартный раствор. 50 г глюкозы разводят в мерной колбе до 50 мл 0,25%-ным раствором бензойной кислоты .

5. 2,4-Динитрофенилгидразин, 0,1%-ный раствор. 20 мл концентрированной соляной кислоты доводят дистиллированной водой до 100 мл (приблизительно 2 н HCl). В колбу Эрленмейера отвешивают 100 мг 2,4-динитрофенилгидразина и добавляют постепенно 100 мл приготовленного 2 н раствора соляной кислоты до полного растворения 2,4-фенилгидразина. Раствор фильтруют и хранят в холодильнике .

6. Диазореактив готовят в день проведения работы из основного раствора сульфаниловой кислоты. 0,9 г сульфаниловой кислоты растворяют в 9 мл концентрированной соляной кислоты и доводят водой до 100 мл. Сохраняют в темной склянке. Этот основной раствор сульфаниловой кислоты может сохраняться в течение 2 недель. 1,5 мл основного раствора сульфаниловой кислоты наливают в стоящую во льду мерную колбу на 50 мл, добавляют 1,5 мл 5%-ного раствора азотистокислого натрия. Через 5 мин добавляют при помешивании еще 5 мл 5%-ного раствора азотистокислого натрия. Через 1 мин постепенно добавляют (при охлаждении) воду до метки. Перемешивают и оставляют раствор на льду на 15 мин. Раствор диазореактива может сохраняться на льду в течение суток .

7. KOH, 1 н спиртовой раствор. 1 объем 11 н раствора KOH смешивают с 10 объемами 90%-ного этилового спирта. Готовят в день анализа .

8. Железосинеродистый калий (красная кровяная соль [K3Fe(CN6)]). Растворяют 1 г феррицианида калия и 1 г NaOH в 50 мл воды .

9. Индигокармин, раствор. 1 г индигокармина растирают в фарфоровой ступке, растворяют в 50 мл концентрированной серной кислоты, осторожно доводят водой до 1 л, фильтруют и хранят в темной склянке .

10. Йод, 0,1 н основной раствор. 1,27 мл йода и 3,23 мл йодистого калия растворяют на 100 мл воды. Сохраняется в темной склянке в холодильнике в течение 6 месяцев .

11. Йод, 0,025 н рабочий раствор. Отмеривают 25 мл основного 0,1 н раствора йода, добавляют 17 мл концентрированной соляной кислоты и доводят водой до метки 100 мл. Можно хранить в течение 3 месяцев в холодильнике .

12. Насыщенный раствор NaCl. 30 г хлористого натрия растворяют в 100 мл воды и осаждают 10%-ным раствором NaOH .

13. Пировиноградная кислота, раствор. 50 мг пировиноградной кислоты или 62,5 мг натриевой соли пировиноградной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Раствор содержит 0,5 мг пировиноградной кислоты в 1 мл .

14. Реактив Фоля. К 5–10%-ному раствору уксуснокислого свинца прибавляют 10%-ный раствор NaOH до растворения образовавшегося осадка .

15. Реактив Феллинга. Готовят отдельно два раствора:

а) 200 г K,Na-виннокислого и 150 г NaOH разводят в мерной колбе на 1 л;

б) 40 г медного купороса разводят в мерной колбе на 1 л .

Перед применением смешивают равные объемы этих растворов .

ПРИГОТОВЛЕНИЕ МОЮЩИХ СМЕСЕЙ

Смесь Комаровского. К 100 мл 6 н раствора HCl добавляют 100 мл 5–6 %-ного раствора Н2О2 .

Хромовая смесь .

1-й способ: 200 г K2Cr2O7 растворяют в 1 л HNO3 конц. (избегать попадания в хромовую смесь этанола и метанола, окисляющих Cr2O72-ион до Cr3+ (раствор окрашивается в зеленый цвет и непригоден для применения)) .

2-й способ: 6 г Na2Cr2O7 растворяют в 100 мл H2O + 100 мл H2SO4 (1,84) Хромовую смесь, приготовленную на H2SO4, не применяют, если посуда загрязнена солями Ba .

Марганцевокислый К на серной кислоте. К 100 мл 4 % раствора КMnO4, непосредственно перед употреблением для мытья добавить (для разогревания и усиления окислительных свойств) 3–5 мл H2SO4 конц .

(HCl брать нельзя, так как образуется Cl2). Смесь используют однократно!

Если после мытья образуется бурый налет на посуде, то его удаляют раствором щавелевой кислоты, 5% раствором NaHSO3 или FeSO4 .

ОТНОСИТЕЛЬНАЯ ПЛОТНОСТЬ И КОНЦЕНТРАЦИЯ

МИНЕРАЛЬНЫХ КИСЛОТ

–  –  –

1,100 2,985 17,10 1,440 17,06 74,68 1,200 6,159 32,34 1,460 18,53 79,98 1,300 9,795 47,48 1,480 20,21 86,05 1,340 11,49 54,07 1,500 22,39 94,09 1,360 12,42 57,57 1,510 23,50 98,10 1,380 13,42 61,27 1,520 24,04 99,67

–  –  –

1,100 6,037 20,01 1,160 10,03 31,52 1,110 6,673 21,92 1,170 10,74 33,46 1,120 7,317 23,82 1,180 11,45 35,38 1,130 7,981 25,75 1,190 12,15 37,23 1,140 8,648 27,66 1,200 12,87 39,11 1,150 9,327 29,57 Относительная плотность и концентрация растворов аммиака

–  –  –

0,960 5,58 9,91 0,910 13,35 24,99 0,950 7,10 12,74 0,900 14,97 28,33 0,940 8,63 15,63 0,890 16,59 31,75 0,930 10,18 18,64 0,882 18,10 34,95 0,920 11,75 21,75

–  –  –

2,2 50 44,0 3,0 50 11,4 2,4 50 32,4 3,2 50 8,2 2,6 50 24,2 3,4 50 6,4

–  –  –

3,6 0,75 9,25 4,8 5,90 4,10 3,8 1,20 8,80 5,0 7,00 3,00 4,0 1,80 8,20 5,2 7,90 2,10 4,2 2,65 7,35 5,4 8,60 1,40 4,4 3,70 6,30 5,6 9,10 0,90 4,6 4,90 5,10 5,8 9,40 0,60

–  –  –

9,10 8,95 25,0 5,0 8,92 8,78 25,0 7,5 8,74 8,60 25,0 10,0 8,62 8,48 25,0 12,5 8,50 8,37 25,0 15,0 8,40 8,27 25,0 17,5 8,32 8,18 25,0 20,0 8,23 8,10 25,0 22,5 8,14 8,00 25,0 25,0 8,05 7,90 25,0 27,5 7,96 7,82 25,0 30,0 7,87 7,73 25,0 32,5 7,77 7,63 25,0 35,0 7,66 7,52 25,0 37,5 7,54 7,40 25,0 40,0 7,36 7,22 25,0 42,5

–  –  –

7,4 1,0 9,0 7,6 1,5 8,5 7,8 2,0 8,0 8,0 3,0 7,0 8,2 3,5 6,5 8,4 4,5 5,5 8,7 6,0 4,0 9,0 8,0 2,0

–  –  –

9,3 50 0,0 9,4 50 11,0 9,6 50 23,0 9,8 50 34,0 10,0 50 43,0

–  –  –

8,6 50 4,0 8,8 50 6,0 9,0 50 8,8 9,2 50 12,0 9,4 50 16,8 9,6 50 22,4 9,8 50 27,2 10,0 50 32,0 10,4 50 38,6

–  –  –

ОСНОВНЫЕ ПОНЯТИЯ СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ

Спектрофотометрические методы анализа основаны на оценке поглощения световой энергии анализируемыми веществами. Между поглощением (А), пропусканием (Т) и интенсивностью (I) падающего света существует следующая зависимость:

А = -lgТ = lgI0/I, где I0 – интенсивность падающего света; I – интенсивность пропущенного света .

Спектральные свойства веществ определяются их структурными особенностями, а интенсивность светопоглощения – концентрацией вещества в растворе:

A = lc, где – коэффициент молярного поглощения (молярной экстинкции);

l (см) – длина оптического пути (толщина слоя); c (моль/л) – концентрация вещества в растворе .

Коэффициент молярной экстинкции численно равен поглощению раствора с концентрацией 1 моль/л при длине оптического пути 1 см. Он имеет размерность (моль/л)-1.см-1. Для соединений, обладающих высоким уровнем светопоглощения в видимой или УФ области спектра, например, пуринов, пиримидинов, флавиновых и пиридиновых коферментов, гемопротеинов и других ~ 103–105 .

ИНТЕРВАЛЫ ДЛИН ВОЛН ПОГЛОЩАЕМОГО ИЗЛУЧЕНИЯ

–  –  –

25 0 2,7 5,7 8,5 11,7 14,8 18,2 21,4 24,8 28,4 32,1 36,0 40,1 44,2 48,5 52,9 30 0 2,8 5,7 8,7 11,9 15,0 18,4 21,7 25,3 28,9 32,8 36,7 40,8 45,1 49,5 35 0 2,8 5,8 8,8 12,0 15,3 18,7 22,1 25,8 29,5 33,4 37,4 41,6 45,9 40 0 2,9 5,9 9,0 12,2 15,5 19,0 22,5 26,2 30,0 34,0 38,1 42,4 45 0 2,9 6,0 9,1 12,5 15,8 19,3 22,9 26,7 30,6 34,7 38,8 50 0 3,0 6,1 9,3 12,7 16,1 19,7 23,3 27,2 31,2 35,3 55 0 3,0 6,2 9,4 12,9 16,3 20,0 23,8 27,7 31,2 60 0 3,1 6,3 9,6 13,1 16,6 20,4 24,2 28,3 65 0 3,1 6,4 9,8 13,4 17,0 20,8 24,7 70 0 3,2 6,6 10,0 13,6 17,3 21,2 75 0 3,2 6,7 10,2 13,9 17,6 80 0 3,3 6,8 10,4 14,1 85 0 3,4 6,9 10,6 90 0 3,4 7,1 95 0 3,5

–  –  –

а) Вольфрамовая кислота Раствор А. 10%-ный (масс./об.) раствор вольфрамата натрия (Na2WO4.2H2O) в воде .

Раствор Б. 0,335 моль/л раствор H2SO4 .

Образец ткани гомогенизируют с водой до желаемого разбавления, затем добавляют раствор вольфрамата, после чего по каплям, тщательно перемешивая, доливают равный объем серной кислоты. В другом варианте равные объемы растворов А и Б можно смешать перед добавлением к образцу. Смешанный реагент неустойчив; его не следует хранить более двух недель, при появлении осадка готовить заново .

Фильтрат, получаемый в результате осаждения вольфрамовой кислотой, имеет рН ~ 6,5 .

Приблизительные количества растворов вольфрамата и серной кислоты, необходимые для полного осаждения белка (из тканей крысы) приведены ниже:

–  –  –

б) Сульфат цинка – щелочь 1-й способ:

Раствор А. 10%-ный раствор ZnSO4.7Н2О .

Раствор Б. 0,5 моль/л раствор NaOH .

Вместо ZnSO4 можно использовать сульфат кадмия, однако никаких особых преимуществ как осадитель белка он не дает .

При титровании по фенолфталеину на 10 мл раствора А, разбавленного 70 мл Н2О, расходуется ~ 11 мл раствора Б (в течение достаточно долгого времени должна сохраняться розовая окраска) .

1 мл крови разбавляют до 8 мл, добавляют 1 мл раствора А, перемешивают, добавляют 1 мл раствора Б, вновь перемешивают и фильтруют. В случае других тканей реагенты берут в тех же соотношениях, что и при использовании вольфрамовой кислоты .

2-й способ:

Раствор А. К 12,5 г ZnSO4.7Н2О добавляют 125 мл 0,125 моль/л H2SO4. Общий объем раствора доводят до 1 л водой .

Раствор Б. 0,75 моль/л NaOH .

При титровании по фенолфталеину на 50 мл раствора А расходуется ~ 6,7–6,8 мл раствора Б (в течение достаточно долгого времени должна сохраняться розовая окраска) .

К 1 мл крови добавляют 8 мл раствора А и перемешивают, добавляют 1 мл раствора Б, перемешивают и фильтруют. В случае других тканей работают по этой же методике .

3-й способ:

Раствор А. 5%-ный раствор ZnSO4.7H2О .

Раствор Б. 0,15 моль/л Ba(OH)2 .

При титровании по фенолфталеину на 10 мл раствора А, разбавленного 100 мл Н2О, расходуется 10 мл раствора Б (в течение достаточно долгого времени должна сохраняться розовая окраска) .

1 мл крови разбавляют 5 мл Н2О, добавляют 2 мл раствора А, перемешивают и добавляют 2 мл раствора Б; раствор перемешивают и фильтруют. В случае других тканей работают по этой же методике .

в) Трихлоруксусная кислота При исследовании крови смешивают 1 мл образца с 9 мл 10 % (масс./об.) раствора трихлоруксусной кислоты; раствор центрифугируют или фильтруют. В случае тканевых экстрактов, инкубационных смесей ферментов и других объектов для обеспечения полного осаждения белков обычно достаточно использовать трихлоруксусную кислоту с конечным ее содержанием в белоксодержащем объекте 3–5 % (масс./об.) .

Небелковый азот остается в супернатанте. После удаления осадка белка трихлоруксусную кислоту в значительной мере можно удалить из супернатанта путем многократной экстракции диэтиловым эфиром, насыщенным водой .

г) Хлорная кислота В случае тканевых экстрактов, инкубационных смесей ферментов и других объектов добавляют такое количество хлорной кислоты, чтобы ее конечное содержание в белоксодержащем объекте составило 3–5 % (0,3– 0,5 моль/л). После центрифугирования избыток хлорной кислоты можно осадить в виде калиевой соли, нейтрализуя супернатант раствором КОН .

К2СО3 или К3РО4 при охлаждении до 0 °С (осадок КClО4 удаляют путем центрифугирования). Не следует допускать нагревания реакционной смеси во время центрифугирования, так как раст-сть КClО4 гораздо выше при комнатной температуре, чем при 0 °С .

д) Этанол Добавляют такое количество этанола, чтобы конечное содержание составило 75–80% (об./об.); смесь нагревают (лучше до кипения в течение 1–2 мин), охлаждают, центрифугируют и декантируют супернатант. Для удаления этанола и липидного материала добавляют 3 объема СНCl3; смесь тщательно перемешивают и центрифугируют .

Этанол переходит в слой (нижний) СНCl3 .

ДИАЛИЗ

Диализ используют для очистки белков (др. высокомолекулярных соединений) от низкомолекулярных примесей или для замены состава среды. Метод основан на том, что молекулы белка из-за своих размеров не могут проходить через полупроницаемые мембраны, в то время как низкомолекулярные вещества равномерно распределяются между объемом, ограниченным мембраной, и окружающим раствором. После многократной замены внешнего раствора состав среды в диализном мешочке, приготовленном из полупроницаемой мембраны (концентрация солей, величина pH и другое) будет тот же, что и в окружающем растворе .

МЕТОД ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИИ

Гель-хроматография (гель-фильтрация) – фракционирование смеси компонентов по размерам молекул путем прохождения их через гели с определенной величиной пор .

Раствор, содержащий смесь двух и более веществ, отличающихся по размеру молекул, а следовательно, и по молекулярной массе, вносят в колонку, заполненную гелем с сетчатой структурой и уравновешенную буферным раствором. Наибольшей скоростью продвижения по колонке обладают компоненты раствора, размеры молекул которых больше пор геля. Такие компоненты не проникают в гранулы гелевой фазы и выходят из колонки первыми. Более мелкие молекулы, способные проникать внутрь геля, непрерывно обмениваются между жидкими фазами внутри и вне геля и продвигаются по колонке значительно медленнее .

Находящиеся в растворе самые маленькие частицы (например неорганические соли) выходят из колонки последними. На этом принципе основаны методы фракционирования белков и других полимеров, их обессоливание, определение молекулярной массы, замена одних буферных растворов другими и др .

Наиболее широкое распространение среди носителей для гельхроматографии белков получили сорбенты, приготовленные на основе декстрана (сефадексы, сефакрилы, молселекты), полиакриламида (биогели Р, акрилексы) и агарозы (сефарозы, биогели А) и др. Набухая в воде, они образуют гели .

Сефадексы – продукты взаимодействия полисахарида декстрана с эпихлоргидрином. Они устойчивы к органическим растворителям, растворам щелочей и разбавленных кислот (до 0,1 н). Рабочий диапазон рН составляет 2–10. Гели декстрана подвержены действию сильных окислителей, вызывающих образование карбоксильных групп .

Номера в маркировке сефадексов характеризуют их пористость .

Выбор определенной марки сефадекса определяется молекулярной массой исследуемого белка (чем больше соответствие размеров молекул и величины пор, тем выше селективность), а степень зернения – поставленной задачей. Для обессоливания растворов белков и их концентрирования обычно используют сефадексы G-25 и G-50 (грубый или средний). При разделении же смеси белков пользуются сефадексами тонкого или сверхтонкого зернения. Чем мельче частицы геля, тем эффективнее происходит разделение, но тем меньше скорость протекания раствора через колонку .

При работе сефадексам дают предварительно набухнуть в избытке растворителя. Время и температура набухания указаны в соответствующих таблицах .

Реактивы:

1. Натрий-фосфатный или калий-фосфатный буфер — 0,05 моль/л раствор, содержащий 0,05 моль/л КСl, рН 6,5 .

2. Сефадекс G-100 .

3. Белки с определенной молекулярной массой (Да): яичный альбумин (45000), бычий сывороточный альбумин (68000), рибонуклеаза из поджелудочной железы (12700), цитохром с (13000) .

4. Голубой декстран (2 000 000 Да) .

5. Сахароза .

Разделение белков на колонках с сефадексом. Сухой сефадекс суспендируют в 200-кратном объеме воды и оставляют стоять на 48 ч при комнатной температуре до полного набухания. Процесс можно ускорить, проводя его на кипящей водяной бане в течение 5 ч .

Подготавливают колонку (размером 1,5х50 см3), в нее вносят относительно густую суспензию полностью набухшего геля. Для предотвращения образования пузырьков воздуха в слое геля в колонке суспензию сефадекса перед заполнением колонки можно деаэрировать с помощью водоструйного насоса в колбе Бунзена или вносить его в колонку при температуре, значительно превышающей комнатную (50– 60 °С). Сефадексу в колонке дают отстояться, затем с целью уравновешивания и достижения постоянной высоты столба геля колонку промывают 3–5 объемами буферного раствора. Гидростатическое давление для сефадекса G-100 не должно превышать 50 см: h = 20–50 см (давление при разделении образца и при заполнении колонки должно быть одинаковым). Для проверки равномерности заполнения через колонку можно пропустить раствор окрашенного белка, например цитохрома с или голубого декстрана. При этом окрашенная зона должна быть компактной и двигаться по колонке параллельно ее основанию .

Исследуемую белковую смесь растворяют в буферном растворе в объеме 1 мл (по 2–4 мг каждого белка) и вносят в колонку, увеличив плотность раствора добавлением сахарозы до 0,5 моль/л .

Перед использованием колонки определяют ее свободный объем (Vo). Для этого через колонку пропускают 1 мл (1 мг/мл) раствора голубого декстрана в 0,5 моль/л растворе сахарозы. В качестве растворителя, как для голубого декстрана, так и для исследуемых белков применяют тот же буферный раствор, которым уравновешена колонка .

Им же элюируют белки с колонки после нанесения анализируемой смеси .

Следует отметить, что, поскольку положительно заряженные частицы могут частично взаимодействовать с сефадексом (за счет имеющихся карбоксильных групп), для элюции обычно используют растворы с ионной силой выше 0,02. Если исследуемые белки после гельхроматографии надлежит лиофилизировать, для элюции используют летучие буферные растворы (аммоний бикарбонатный, ацетатный, формиатный и др.) .

Для аналитических целей рекомендуется отношение длины к диаметру колонки 10 : 1 или 20 : 1. При обессоливании используют более короткие и широкие колонки. Объем наносимого образца при аналитическом разделении должен быть по возможности небольшим (2– 3% от общего объема колонки – Vt). При обессоливании его можно увеличить до 20–30%. Рекомендуемая концентрация белка – 1%. При анализе высокомолекулярных белков концентрацию уменьшают до 0,1– 0,5% .

Вытекающий из колонки буферный раствор собирают в пробирки порциями по 1–3 мл. Регистрацию объема элюата, прошедшего через колонку, начинают с момента нанесения образца на колонку. Содержание белка во фракциях определяют спектрофотометрически при 280 нм .

Оптическую плотность растворов, содержащих рибонуклеазу, определяют при 230 нм, голубой декстран – при 650 нм, цитохром с – при 412 нм. После окончания анализа колонку промывают несколькими объемами буферного раствора. Строят профиль элюирования отдельных белковых фракций. Для этого вычерчивают график, на горизонтальной оси которого откладывают номера пробирок (фракций) или объем прошедшей через колонку жидкости, а на вертикальной оси – величины оптической плотности фракций .

Регенерация и хранение сефадекса. Многократное использование колонки с сефадексом приводит к замедлению протекания жидкости через нее. В этом случае гель извлекают из колонки, отмучивают его от мелких частиц и колонку набивают заново .

Сефадексы можно хранить в виде суспензии или в сухом виде .

Суспензию сефадекса следует хранить в холодильнике в присутствии антисептиков: 0,02%-ного раствора азида натрия, мертиолата или хлороформа. Для переведения геля в сухое состояние сефадекс сначала промывают водой для удаления солей, а затем выдерживают несколько минут с 2-кратным объемом 50%-ного этанола; после фильтрования на воронке Бухнера сефадекс выдерживают с 2-кратным объемом 96%-ного этанола. Обработку последним повторяют несколько раз. Осадок высушивают в термостате при 60–80 °С .

ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ В

БИОХИМИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ

1. Общие требования безопасности

1.1. К работе с химическими веществами допускаются лица не моложе 18 лет, прошедшие медицинский осмотр (предварительный – при устройстве на работу, периодический – 1 раз в 3 года), не имеющие противопоказаний и допущенные по состоянию здоровья к работе, прошедшие обучение и инструктаж по охране труда:

1.1.1. первичный – на рабочем месте;

1.1.2. повторный – не реже одного раза в 6 месяцев;

1.1.3. внеплановый – при принятии новых нормативных правовых актов, изменений и дополнений в инструкцию; нарушении работником инструкции, что могло привести к несчастному случаю; при поступлении информации о несчастных случаях, происшедших в однопрофильных организациях; целевой – при выполнении разовых работ, не связанных с прямыми обязанностями по специальности (погрузка, разгрузка, уборка территории и т. д.) .

1.2. Работник обязан соблюдать правила внутреннего трудового распорядка, правила пожарной безопасности, знать места расположения средств пожаротушения (огнетушители, кошма, одеяло, песок) .

Загромождение и захламление помещений, проходов, подходов к средствам пожаротушения, кранам выключения воды, шкафам и электрощитам не допускается. Курить разрешается только в специально отведенных местах .

1.3. Запрещается употребление алкогольных, наркотических и токсических средств перед работой и в процессе работы .

1.4. Во время работы на работника могут воздействовать следующие опасные и вредные производственные факторы:

1.4.1. токсичность химических веществ;

1.4.2. опасность получения химических и термических ожогов;

1.4.3. повышенная загазованность воздуха рабочей зоны;

1.4.4. пожароопасность, способность к взрывам легко воспламеняющихся и горючих жидкостей (ЛВЖ и ГЖ);

1.4.5. опасность травмирования осколками стекла;

1.4.6. опасность поражения электрическим током;

1.4.7. недостаточная освещенность рабочей зоны .

1.5. В соответствии с типовыми нормами выдачи средств индивидуальной защиты, приложением № 5 к Коллективному договору 2007-2010 гг., работнику выдается:

–  –  –

1.6. Работник обязан:

1.6.1. работать на исправном оборудовании, с исправными приспособлениями, используя их по прямому назначению;

1.6.2. выполнять только ту работу, которая ему поручена и по которой он проинструктирован по охране труда;

1.6.3. во время работы быть внимательным, не отвлекаться посторонними делами и разговорами, а также не отвлекать других;

1.6.4. соблюдать все указания по безопасному обращению с реактивами и растворами, наполнению сосудов и т.п .

1.6.5. сообщать непосредственному руководителю работ о замеченных нарушениях требований безопасности на своем рабочем месте, а также о неисправностях оборудования, приспособлений, средств индивидуальной защиты и не приступать к работе до устранения этих неисправностей. Когда неисправность может устранить сам работник, то он обязан сделать это немедленно, а затем доложить об этом начальнику;

1.6.6. для защиты кожи рук применять силиконовый крем;

1.6.7. соблюдать правила личной гигиены:

1.6.7.1. мыть руки водой с мылом перед приемом пищи, посещением туалета и курением;

1.6.7.2. не хранить пищу на рабочем месте, принимать пищу в специально оборудованном для этой цели помещении;

1.6.8. знать, где находится аптечка с набором медикаментов;

1.6.9. вести журнал производства работ .

1.7. При выполнении работ с химическими веществами в любое время суток в лаборатории должны находиться не менее 2-х человек, при этом один из них назначается старшим .

1.8. Химические вещества хранить в лабораториях с учетом их суточной потребности, а также по принципу однородности в соответствии с их физико-химическими свойствами .

1.9. Запрещается:

1.9.1. пробовать на вкус химические вещества;

1.9.2. нюхать какие-либо вещества, вдыхая полной грудью, а не направляя к себе пары движением руки;

1.9.3. пользоваться вытяжными шкафами с разбитыми стеклами или с неисправной вентиляционной тягой;

1.9.4. работать без вытяжки с ЛВЖ и ГЖ, летучими веществами, например, соляной, азотной кислотами, аммиачными жидкостями и др.;

1.9.5. нагревать ЛВЖ и ГЖ на открытых электрических плитках;

1.9.6. покидать рабочее место, оставляя без присмотра химические вещества, зажженные горелки и нагревательные приборы;

1.9.7. ранить растворы щелочей, концентрированных кислот, ЛВЖ и ГЖ в тонкостенной стеклянной посуде;

1.9.8. оставлять химические вещества в посуде без этикеток;

1.9.9. проводить химические опыты в грязной или поврежденной посуде;

1.9.10. загромождать рабочие места склянками с реактивами, ненужными приборами;

1.9.11. оставлять не убранные пролитые и рассыпанные на рабочих местах и полу химические вещества;

1.9.12. мыть полы и стены органическими растворителями .

1.10. При каждом несчастном случае, очевидцем которого стал работник, он должен немедленно оказать пострадавшему первую доврачебную помощь, вызвать врача или доставить пострадавшего в ближайшее медицинское учреждение, сообщить руководителю структурного подразделения .

1.11. За нарушение требований инструкции работник несет ответственность согласно Правилам внутреннего трудового распорядка и действующему законодательству Республики Беларусь .

2. Требования безопасности перед началом работы

2.1. Перед началом работы работник должен надеть спецодежду, застегнуть ее на все пуговицы .

2.2. Подготовить средства защиты глаз, органов дыхания и кожи .

2.3. Освободить рабочее место от всех ненужных для работы предметов .

2.4. Провести внешний осмотр приборов, с которыми предстоит работать, проверить их исправность, заземление, целостность сетевого кабеля .

2.5. Проверить целостность посуды .

2.6. Ознакомиться со свойствами реактивов, с которыми будет проводиться работа, изучить инструкцию (методику) по ее выполнению .

2.7. Включить вентиляционную тягу .

3. Требования безопасности во время работы

3.1. Кислоты и щелочи 3.1.1. Кислоты и щелочи в своем большинстве относятся к веществам повышенной опасности, поэтому в целях предотвращения химических ожогов и отравлений у работников, на рабочих местах необходимо иметь соответствующие нейтрализующие вещества .

3.1.2. Расфасовку кислот необходимо производить в специальном помещении, концентрированные кислоты должны поступать в лабораторию в таре емкостью не более 1 литра. Стеклянные бутылки должны плотно закрываться пробками и заполняться не более 80 % их объема .

3.1.3. Переливать концентрированные кислоты следует только с включенной местной вентиляцией или в вытяжном шкафу, при помощи сифонов с грушей или ручных насосов. В случае перерыва действия вентиляции, все работы в вытяжных шкафах немедленно прекратить .

3.1.4. Для приготовления растворов серной, азотной и других кислот их необходимо приливать в воду тонкой струей при непрерывном перемешивании. Приливать воду в кислоту запрещается!

3.1.5. Не применять серную кислоту в вакуумэксикаторах в качестве водопоглощающего средства .

3.1.6. При работе с плавиковой кислотой следует соблюдать особую осторожность. Попадание кислоты на кожу, в особенности на ногти вызывает сильную боль и трудно заживающие раны. Вдыхание паров плавиковой кислоты вызывает воспаление верхних дыхательных путей и порчу зубов. Для хранения плавиковой кислоты следует применять бутыли из полиэтилена, т.к. она разрушает стекло .

3.1.7. При смешивании веществ, сопровождающимся выделением тепла, необходимо пользоваться термостойкой стеклянной или фарфоровой посудой. Сосуд с горячей смесью нельзя закрывать плотно пробкой до тех пор, пока он не остынет .

3.1.8. Растворение щелочей следует производить путем прибавления к воде небольших порций вещества при непрерывном помешивании и охлаждении. Щелочь необходимо брать фарфоровыми ложечками, совочками или шпателями, т.к. она и в сухом виде при попадании на кожу может вызвать ожоги .

3.1.9. Во избежание ожогов полости рта, а также возможности отравления, запрещается! набирать растворы кислот и щелочей в пипетку ртом. Для этой цели следует применять резиновую грушу или другие приспособления для отбора проб .

3.1.10. Хромовая смесь, используемая для мытья посуды, вызывает сильные ожоги, а также может причинить тяжелое хроническое заболевание с омертвлением тканей почти до костей, поэтому мыть посуду хромовой смесью необходимо в перчатках, фартуке, защитных очках или маске .

3.1.11. В лабораториях концентрированные растворы кислот хранить в бутылках на противнях под тягой или в нижней части вытяжного шкафа. Недопустимо совместное хранение органических и неорганических кислот .

3.1.12. Хранить твердые щелочи и их растворы необходимо в хорошо закрытой посуде. Бутыли со щелочами нельзя закрывать стеклянными притертыми пробками .

3.1.13. Отработанные кислоты и щелочи следует собирать раздельно в специальную посуду и после нейтрализации сливать в канализацию (или другое место, определенное для этих целей) .

3.2. Легковоспламеняющиеся и горючие жидкости 3.2.1. Работник должен помнить, что легковоспламеняющимися жидкостями являются горючие жидкости с температурой вспышки в закрытом тигле не выше 334°К (61°С), отличающиеся способностью образовывать паровоздушные смеси, воспламенение которых возможно не только от открытого пламени, но и от предметов, нагретых до температуры, превышающей температуру самовоспламенения данной смеси .

3.2.2. ЛВЖ и ГЖ следует доставлять в лабораторию в закрытой посуде, помещенной в тару с ручками. Емкость стеклянной посуды при работе с ЛВЖ и ГЖ не должна превышать 1 литра .

3.2.3. Запас хранящихся в каждом рабочем помещении ЛВЖ и ГЖ не должен превышать суточной потребности – не более 5 литров .

Суточная норма потребности ЛВЖ и ГЖ должна быть согласована и утверждена руководителем структурного подразделения. При выполнении работ с большим количеством (свыше 5 л) огнеопасных жидкостей, руководитель структурного подразделения должен получить письменное разрешение проректора, курирующего данное подразделение, согласованное с управлением охраны труда и инспектором Госпожарнадзора .

3.2.4. Запрещается! хранение в лабораториях ЛВЖ с температурой кипения ниже 323 К (50 °С) (дивинил, изопрен, диэтиловый эфир и др.) в количествах, превышающих суточную потребность .

3.2.5. Хранить ЛВЖ и ГЖ в лаборатории необходимо в толстостенной стеклянной посуде с герметично закрьшающимися пробками, помещенной в специальные металлические ящики с крышками, стенки и дно которых должны быть выложены стеклотканью .

3.2.6. Переливать ЛВЖ и ГЖ следует только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, выключенных электронагревательных приборах и отсутствии рядом окислителей (азотная кислота, бром, перекись водорода, хлораты и др.) .

3.2.7. ЛВЖ и ГЖ перед анализом, требующим нагрева, должны быть предварительно обезвожены во избежание вспенивания и разбрызгивания .

3.2.8. При работах, связанных с подогревом и последующей конденсацией и охлаждением паров ЛВЖ и ГЖ (разгонке, кипячении и др.), нужно сначала отрегулировать поток воды, проходящий через холодильник, и только после этого включить электронагревательные приборы .

3.2.9. Производить нагревание и перегонку ЛВЖ необходимо в кругло донных тонкостенных колбах на водяной или масляной бане с использованием электроплиток с закрытой спиралью и регулятором температуры. Электроплитку следует размещать таким образом, чтобы ее можно было легко удалить в случае аварии. Досуха перегонка ЛВЖ запрещена!

3.2.10. Отгонка ЛВЖ с использованием вакуум-насосов, роторных вакуумных испарителей, центрифуг должна производиться только после изучения и усвоения исполнителями инструкций по технике безопасности на проведение таких работ .

3.2.11. В случае прекращения подачи воды при работающей установке по перегонке ЛВЖ следует прекратить процесс перегонки, отключить электроэнергию, перекрыть краны подачи воды, опустить баню или колбонагреватель .

3.2.12. Запрещается! вносить посторонние тела, особенно пористые и порошкообразные (активированный уголь, пемзу, капилляры и т.п.) в нагретые ЛВЖ .

3.2.13. Не допускать перегрева реакционной смеси или перегоняемой жидкости, приводящего к слишком бурному ходу реакции или внезапному вскипанию перегретой жидкости .

3.2.14. Запрещается! нагревать на водяных банях вещества, вступающие в реакцию, в результате которой может произойти взрыв или выделение паров и газов .

3.2.15. Следует соблюдать особую осторожность при работе с диэтиловым эфиром. Из-за низкой температуры вспышки (20 °С) достаточно очень небольшого источника для его воспламенения или взрыва паров в смеси с воздухом .

3.2.16. Диэтиловый эфир следует хранить в посуде из темного стекла, изолированно от других веществ, в холодном и темном месте, т.к .

при его хранении на свету образуется взрывчатое вещество – пероксиды .

3.2.17. Перед разборкой приборов с ЛВЖ необходимо убедиться в отсутствии вблизи включнных газовых горелок и электронагревательных приборов .

3.2.18. Сосуды, в которых проводились работы с ЛВЖ и ГЖ, после окончания работы должны быть немедленно освобождены от оставшейся жидкости и промыты .

3.2.19. Посуду после органических веществ нельзя мыть хромовой смесью, т.к. возможны возгорания и взрыв .

3.2.20. Запрещается! выливать горючие жидкости в канализацию .

Отработанные жидкости следует собирать в соответствии с характером вещества раздельно в специально герметично закрывающую посуду, в которой их в конце рабочего дня удаляют из лаборатории для регенерации или уничтожения в установленном месте .

3.2.21. Спецодежду, загрязненную ЛВЖ и ГЖ, а также окислителями, необходимо немедленно заменить во избежание возможного воспламенения .

4. Требования безопасности в аварийных ситуациях

4.1. При возникновении ситуаций, которые могут привести к аварии или несчастным случаям необходимо немедленно прекратить работу и обесточить электрооборудование .

4.2. В случае возникновения пожара, работник обязан:

4.2.1. немедленно сообщить в пожарную аварийно-спасательную службу по тел. 101, четко назвать адрес учреждения, место пожара, свою фамилию и должность, а также сообщить о наличии в здании людей;

4.2.2. приступить к ликвидации пожара имеющимися первичными средствами пожаротушения, оповещению людей, их эвакуации и эвакуации материальных ценностей, предотвращению паники;

4.2.3. обеспечить встречу пожарных аварийно-спасательных подразделений;

4.2.4. принять меры по вызову к месту пожара администрации учреждения .

4.3. Возникший пожар следует ликвидировать на месте путем прекращения доступа воздуха к горящей зоне. Для этого использовать углекислотные, порошковые огнетушители, мокрые тряпки, кошму, одеяло, песок .

4.4. При возгорании не растворимых в воде веществ (эфиры, углеводороды и их производные, высшие спирты) нельзя применять для тушения воду, т.к. пожар не только не будет локализован, но даже может усилиться. Многие огнеопасные органические вещества легче воды и при соприкосновении с ней образуют горящую пленку. Следует тушить песком, накрыванием противопожарным полотнищем, порошковыми огнетушителями .

4.5. При возгорании веществ растворимых в воде (низшие спирты, ацетон, диметилформамид, диоксан) их можно гасить водой, а также вышеуказанными средствами .

4.6. При получении травмы на производстве пострадавшего освобождают от действия травмирующего фактора – электротока, механизмов и др., на месте оказывают первую помощь с использованием средств и медикаментов, имеющихся в аптечке лаборатории, при необходимости отправляют в медицинское учреждение, сообщают о случившемся непосредственному руководителю. Сохраняют рабочее место без изменений на момент получения травмы, если это не угрожает окружающим .

4.7. При проливе концентрированных кислот или растворов щелочей, необходимо место пролива засыпать песком, нейтрализовать слабыми растворами щелочей и кислот (2–3%-ными) соответственно, после этого произвести уборку и проветрить помещение. Осколки разбитого стекла собрать при помощи щетки и совка .

4.8. При случайном разливе горючей жидкости необходимо немедленно выключить все источники открытого огня и электронагревательные приборы (если пролито большое количество горючей жидкости, то отключить источники открытого огня и в соседних лабораториях). Место пролива жидкости засыпать песком, загрязненный песок собрать совком. Ликвидировать аварию, связанную с разливом ЛВЖ и ГЖ необходимо используя средства индивидуальной защиты .

Даже разлив 50 мл ЛВЖ можно считать аварийным, т.к. это приводит к превышению ПДК в 100 и более раз .

4.9. При ожогах кожи кислотами и щелочами следует быстро промыть обожженное место сильной струей воды на протяжении 10–15 мин, затем наложить примочку из раствора питьевой соды (1 ч.л. на стакан воды) – при ожоге кислотой, и из борной кислоты или столового уксуса (1.ч.л. на стакан воды) – при ожоге щелочью .

4.10. В случае попадания брызг плавиковой кислоты на кожу следует немедленно промыть обожженное место сильной струей воды и приложить компресс из 5%-ного раствора бикарбоната натрия .

4.11. При термических ожогах обожженное место следует присыпать бикарбонатом натрия (содой), крахмалом, тальком или сделать примочки из свежеприготовленных 2%-ных растворов соды, перманганата калия или неразбавленного этилового спирта в зависимости от степени термического ожога .

4.12. При попадании в глаза брызг кислоты или щелочи необходимо их промывать длительное время большим количеством воды, направляя нерезкую струю воды прямо в глаз, а затем промыть 3%-ным раствором соды (при попадании кислоты) или 2%-ным раствором борной кислоты (при попадании щелочи) .

4.13. При попадании в глаза посторонних предметов (стекло, и др.) удаление их должен проводить только медицинский работник .

4.14. При порезах рук или других частей тела стеклом необходимо удалить из раны мелкие осколки, после чего промыть ее 2%-ным раствором перманганата калия или этиловым спиртом, смазать йодной настойкой и забинтовать .

4.15. При случайном отравлении хлороформом, толуолом, ксилолами необходимо промыть рот, глаза, нос раствором бикарбоната натрия, дать молоко и затем 10 г окиси магния в 150 мл воды и кислородную подушку .

4.16. При отравлении дихлорэтаном – при легком отравлении пострадавшего вывести на свежий воздух, дать крепкий чай, при приеме внутрь – вызвать рвоту, выпить 8–10 стаканов воды или слабого (розового) раствора перманганата калия и вызвать рвоту, повторить промывание желудка и дать солевое слабительное .

5. Требования безопасности по окончании работы

5.1. Выключить приборы из электросети и произвести разборку лабораторных приборов .

5.2. Вымыть посуду, привести в порядок рабочий стол .

5.3. Закрыть банки с реактивами и поставить их в установленные места хранения .

5.4. Вымыть руки с мылом, снять спецодежду и повесить ее в установленное место .

5.5. Закрыть водопроводные краны, отключить вентиляционную тягу, выключить свет .

5.6. Отключить напряжение в сети общим рубильником (выключателем), если в лаборатории нет приборов и аппаратов, которые работают круглосуточно (термостат, холодильник и др.). На дверях лабораторий, где они находятся, должны быть таблички с надписями «Включен термостат», «Включен холодильник» .

ПЕРИОДИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ЭЛЕМЕНТОВ Д.И.МЕНДЕЛЕЕВА

ЛИТЕРАТУРА

1. Champe P. Biochemistry / P. Champe., R. Harvey, D. Ferrier .

Lippencott, 2004 .

2. Gilbert H. Basic Concepts in biochemistry / H.Gilbert. Paperbach, 1999 .

3. Алейникова, Т.Л. Руководство к практическим занятиям по биологической химии / Т.Л. Алейникова, Г.В. Рубцова, Н.А. Павлова;

под ред. Е.С. Северина. М.: МГУ, 2000 .

4. Анисимов А.А. Основы биохимии / А.А. Анисимов. М.: Высшая школа, 1987 .

5. Березов Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин .

М.: Медицина, 1990 .

6. Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. Е.С. Северина. М.:

ГЭОТАР-Медиа, 2006 .

7. Брухман Э.Э. Прикладная биохимия / Э.Э. Брухман. М: Наука .

1981 .

8. Галь, Э. Электрофорез в разделении биологических молекул / Э .

Галь, Г. Медьеши, Л. Вероцкеи. М.: Мир, 1982 .

9. Горбачев, В. В. Витамины, микро- и макроэлементы. Справочник / В. В. Горбачев, В. Н. Горбачева. Мн.: Книжный дом;

Интерпрессервис, 2002 .

10. Диксон, М., Уэбб, Э. Ферменты / М. Диксон, Э. Уэбб. М.: Мир, 1982 .

11. Досон Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Эллиот, У. Элиот, К. Джонс. М.: Мир, 1991 .

12. Келети, Т. Основы ферментативной кинетики / Т. Келете. М.:

Мир, 1990 .

13. Кнорре Д.Г. Биологическая химия / Д.Г. Кнорре, С.Д. Мызина .

М.: Высш. школа, 2000 .

14. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия / В.П. Комов, В.Н. Шведова .

М.: Дрофа, 2004 .

15. Коничев, А. С. Биохимия и молекулярная биология. Словарь терминов / А. С. Коничев, Г. А. Севастьянова. М. : Дрофа, 2008 .

16. Кочетов, Г.А. Практическое руководство по энзимологии / Г. А. Кочетов. М. : Высшая школа, 1980 .

17. Коэн, Р. Регуляция ферментативной активности/ Р. Коэн. М.: Мир, 1986 .

18. Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам / под ред. О. Микеша. М.: Мир, 1982 .

19. Ленинджер, А. Основы биохимии / А. Ленинджер. Т.1. М., Мир, 1985 .

20. Мецлер Д. Биохимия / Д. Мецлер. М.: Мир, 1980, Т. 1-3 .

21. Нуклеиновые кислоты / под ред. Э. Чаргаффа и Дж. Дэвидсона .

М.: Изд-во иностранной литературы, 1957 .

22. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Просвещение, 1987 .

23. Остерман, Л. А. Исследование биологических макромолекул изоэлектрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами / Л. А. Остерман. М.: Наука, 1983 .

24. Остерман, Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование / Л. А. Остерман .

М.: Наука, 1981 .

25. Остерман, Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот / Л .

А. Остерман. М.: Мир, 1985 .

26. Плакунов, В.Н. Основы энзимологии / В.Н. Плакунов. М.: Логос, 2001 .

27. Практикум по биохимии / под ред. С.Е. Северина, Г.А .

Соловьевой. М.: Изд-во МГУ, 1989 .

28. Разговоров, П.Б. Биохимические процессы: лабораторный практикум / П.Б. Разговоров. Иваново: Изд-во Иван. гос. хим.-технолог .

ун-та. – 2009 .

29. Рогожин, В. В. Практикум по биологической химии / В. В .

Рогожин. М. : Лань, 2006 .

30. Спирин Л.С. Молекулярная биология. Структура рибосом и биосинтез белка / Л.С. Спирин. М.: Высшая школа, 1986 .

31. Страйер Л. Биохимия / Л. Страйер. М.: Мир, 1985 .

32. Трахтенберг, И. М. Проблема нормы в токсикологии / И. М .

Трахтенберг [и др.]. М. : Медицина, 1991 .

33. Уайт А. Основы биохимии / А.Уайт, Ф. Хендлер, Э. Смит, Р .

Хилл, И. Леман. М.: Мир, 1981, Т. 1-3 .

34. Уотсон, Дж. Молекулярная биология клетки / Дж. Уотсон. М.:

Мир, 1987 .

35. Ферш, Э. Структура и механизм действия ферментов / Э. Ферш .

М.: Мир, 1980 .

36. Филиппович, Ю.Б. Основы биохимии / Ю.Б. Филиппович. М.:

Просвещение, 1999 .

37. Филиппович, Ю.Б. Практикум по общей биохимии / Ю.Б .

Филиппович, Т.А. Егорова, Г.А. Севастьянова. М.: Просвещение, 1975 .

38. Химия и биохимия нуклеиновых кислот / под ред. И.Б. Збарского и С.С. Дебова. Ленинград: Медицина, 1968 .

39. Хроматография. Практическое приложение метода / под ред. Э .

Хефтмана. М.: Просвещение, 1986 .

40. Цыганов А.Р. Биохимия / А.Р. Цыганов, И.В. Сучкова, И.В .

Ковалева. М.: ИВЦ Минфина, 2007 .

41. Цыганов, А. Р. Практикум по биохимии / А. Р. Цыганов, И. В .

Сучкова, И. В. Ковалева / М.: ИВЦ Минфина, 2007 .

42. Шамин А.Н. История биологической химии. Формирование биохимии / А.Н. Шамин. М.: КомКнига, 2006 .

43. Элиот В. Биохимия и молекулярная биология / В. Элиот, Д .

Элиот. М.: МАИК Наука/Интерпериодика, 2002 .

44. Энкерт Р. Физиология человека / Р. Энкерт, Д. Рэнделл, Дж .

Огастин. М.: Мир, 1991, Т. 1-2 .

–  –  –

–––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––– Подписано в печать Формат Бумага офсетная. Гарнитура Таймс Печать офсетная, Усл. Печ. Л. Уч.-изд. л. Тираж 300 экз. Зак .

–  –  –



Pages:     | 1 | 2 ||



Похожие работы:

«A C TA U N I V E R S I TAT I S L O D Z I E N S I S FOLIA LINGUISTICA ROSSICA 12, 2016 http://dx.doi.org/10.18778/1731-8025.12.07 Елена Иванян Самарский государственный социально-педагогический университет (...»

«ПРОГРЕСС В ПРОИЗВОДСТВЕ СЕКСИРОВАННОГО СЕМЕНИ Леонардо Ф.С. Брито Директор подразделения "Сексинг Текнолоджиз Дженетикс" по глобальному контролю качества. Введение К 2050 году ожидается, что численность мирового населения достиг...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. А. И. ГЕРЦЕНА" Рабочая программа дисциплины вариативная часть (дисциплины и курсы по выбору) Б. 1.11.8 Модуль Биологический. Гисто...»

«Тема 5. Ф Фотоэлем менты тр ретьего поколени Рын ия. нок и эн нергоресу урсы России ( часа) (2 Фо отоэлементы трет тьего пок коления Фо отоэлемен нты трет тьего по околения – это устройст тва, обе еспечиваю ющие вы...»

«Выставка фотографий "Фото-Радуга ИНЭОС. Пятый кадр". НАШИ АВТОРЫ © Клуб Институтского творчества ИНЭОС РАН (КИТ), 2011 г. ФИО Стр. Баранов Олег Валерьевич Белоусов Юрий Анатольевич Бердникова Дарья Владимировна Бурлаков Владимир Васильевич Грибанв Дмитрий Андреевич Дамшкалн Лидия Григорьевна Заборина Ольга Евгеньевна Киселв Серге...»

«Арифулии Евгений Альбертович СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ НУКЛЕОПРОТАМИНОВОГО ХРОМАТИНА В СПЕРМАТОЗОИДАХ ЧЕЛОВЕКА 03.03.04 клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук 2 1''^ 1 /Г:' Москва-2012 Работа выполнена в отделе электро...»

«ISSN 0513-1634 Бюллетень ГНБС. 2018. Вып. 127 Turkina N.P., Andryushenkova Z.P. Peculiarities of selection of varieties of micranthous chrysanthemum for flower panel arrangement in the Nikitsky Botani...»

«Март 2016 года APRC/16/INF/8 Rev.1 R РЕГИОНАЛЬНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ ФАО ДЛЯ АЗИИ И ТИХОГО ОКЕАНА Тридцать третья сессия Путраджая, Малайзия, 7–11 марта 2016 года Информационная записка Итоги консультаций с участием широкого круга заинтересованных сторон...»

«Глава 2 Биологические условия развития личности подростка Для подростковому периоду характерны: интенсивный рост ("длинноногий подросток"); ускоренный обмен веществ; резкое усиление работы желез внутренней секреции. Это период полового...»

«СИМОНЯН Алина Руслановна НОВЫЕ ГИДРОКСИЛАМИНСОДЕРЖАЩИЕ АНАЛОГИ АГМАТИНА И БИОГЕННЫХ ПОЛИАМИНОВ 03.00.03 Молекулярная биология 02.00.10 Биоорганическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2008 Работа выполнена в Лаборатории...»

«Всесибирская олимпиада по БИОЛОГИИ 2016-17. 3аключительный этап. 7-8 кл. Стр. 1 из 3 16. Животные с внутренним известковым скелетом НЕ Всесибирская олимпиада по встречаются среди биологии 2016-17. 3 этап А. хордовых В. чле...»







 
2018 www.lit.i-docx.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.