WWW.LIT.I-DOCX.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - различные публикации
 


«OIMETISED УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ ТАРТУСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО УНИВЕРСИТЕТА ACTA ET COMMENTATIONES UNI VERSITATIS TARTUENSIS СОЗРЕВАНИЕ ООЦИТОВ, ОПЛОДОТВОРЕНИЕ И ЭМБРИОНАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ КОСТИСТЫХ ...»

ISSN 0207-4591

TARTU RIIKLIKU LIKOOLI

OIMETISED УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ

ТАРТУСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО УНИВЕРСИТЕТА

ACTA ET COMMENTATIONES UNI VERSITATIS TARTUENSIS

СОЗРЕВАНИЕ ООЦИТОВ,

ОПЛОДОТВОРЕНИЕ

И ЭМБРИОНАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ

КОСТИСТЫХ РЫБ

Труды по зоологии TARTU Illil 198 5

RIIKLIKU LIKOOLI TOIMETISED

TARTU

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ

ТАРТУСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО УНИВЕРСИТЕТА

ACTA ET COMMENTATIONES UNIVERSITATIS TARTUENSIS

ALUSTATUD 1893.a. VIHIK 718 ВЫПУСК ОСНОВАНЫ В 1893т .

СОЗРЕВАНИЕ ООЦИТОВ,

ОПЛОДОТВОРЕНИЕ

И ЭМБРИОНАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ

КОСТИСТЫХ РЫБ

Труды по зоологии ТАРТУ 1 985

Редакционная коллегия:

Х.И. Люсг (председатель), Х.Я. Рею«, К.Я. Пылъдвере .

Ответственный редактор D. йготкон Те»туо«ого гоеулжостикжого пшмтп .

»^СТТ01.^Ж)ЮТЮРДП 1 аиюилю* аооюлп .

От»мот»о«жв реджжтоо В. Лотки .

BDoezTOMжI. Опоммю. I. Cajcxa, I. Яго. *. Зеве .

seieri 5.12 .

19« .

•сайт 6Gr9-J/:6 .

Бужвте иош .

ишслви. Гошрат .

дмидриинт пего» 4,95. Печетпа петоа 5,5 .

•*7, 8ССР^ ЭД|400, г. Тарту, у*. Ожгоожж, 14 .

© Тартуский государственный университет. 1985

СОЗРЕВАШЕ И ОВУЛЯЦИЯ ООЦИТОВ КОСТИСТЫХ РИ In Titго

T.B. Саат Изучение закономерностей созревания ооцжтов занимает важное место в современных мссяедованшпс по биологии разви­ тия .

В период созревания ооцжта у позвоночных (а также у большинства беспозвоночных) животных осуществляются мейотические деления и существенно изменяются строение и свойства цитоплазмы; в результате ооцит превращается в яйцо, способ­ ное к оплодотворению и дальнейшему развитию /см. Детлаф, 1977/ .

Систематическое исследование становления организации зрелого яйца в процессе созревания началось около 15 лет то­ му назад. Важцую роль в разработке »той проблемы сыграли ис­ следования, которые показали, что созревание ооцжтов может осуществляться вне тела самки в солевом растворе. Созревание ооцитов in vitro открыло перспективы не только для детально­ го изучения изменений ооцитов в процессе созревания, гормо­ нальной регуляции созревания и овуляции ооцитов, влияния внешних условий на эти процессы, но и для применения микро­ хирургических и молехулярно-бнологических методов исследова­ ния /см. Детлаф, 1977; Kasul,Clarke, 1979/. Основными объ­ ектами исследования являются ооцнты амфибий и осетровых рыб, а также млгхопиталцих и иглокожих. В последние годы в таких исследованиях все чаще используют и социты костистых рыб .

Возможность индукции созревания ооцитов костистых рыб in vitro была установлена еще Я.Д. Киршенблатом /1959, 1961/ на вьюне; за последние годы число видов рыб, у которых удалом получить созревание ооцитов in vitro, значительно увеличи­ лось (табл .

–  –  –





jj, I is ifjM к h. I Is It 13*85 Wotonaga, 1950; Yamauohl, Yamamoto, 1973 Ж Др./. Включены работа, • которых быжо подучено разруление зародьшевого пу­ зырька (ЗП) ооцжтов; те случаж, когда под влжянжем гормонов прожсходждж лжаь самые начальные изменения созревания (слия­ ние желтка ждя жировых капель, миграция ЗП) без последующего жсчеэновенжя ЗП, не учтены /напр., Федоров, 1977/ .

Методика проведения опытов

Время проведения опытов. Опыты проводили, как правило, в период естественного нереста иди незадолго до него (табл. I) .

В более ранние сроки ооцнты плохо реагирует на гормоны; жх Чувствительность можно повысить, предварительно инъецируя самкам гонадотропин /Goetz, Theofan, 1979/ .

При работе с медакой - рыбой небольшого размера, хорошо переносящей содержание в аквариуме, искусственно создают та­ кую продолжительность фотопериода ж температуру воды, какже нужны для размножения. Благодаря этому, опыты можно прово­ дить и вне сезона естественного нереста (табл. I) .

Удобным объектом является вьюн Misgurnus fossiile. У этого вида ооцнты достигают ГУ стадии зрелости уже к осени и в течение зимы способны созревать in vivo /Казанский, Нусенбаум, 1947; Казанский, 1949; Киршекблат, 1961/. Опыты in vitro также можно проводить задолго до наступления нересто­ вого сезона (табл. I); при этом нет необходимости содержать вьюнов в течение длительного времени в нерестовых условиях, как это делают при работе с амурским вьюном /Iwamateu, Каtoh, 1978/ .

Среда культивирования ооцитов. При работе с ооцитами костистых рыб используют различные среды (табл. I и 2). По солевому составу растворы, используемые для культивирования ооцжтов (иди лежащие в основе более комплексных сред), можно разделить на 4 группы .

I) Раствор Рмнгера для амфвбий /Кирвенблат, 1961/ ж близкие по составу растворы для ооцжтов вьюна (увеличено со­ держание бикарбоната натрия) /Скоблина, 1973/, для медаяи /iwamateu, 1973/ И фувдулюса /Wallace, Selman, 1978/. Однако лупе результаты в случае ооцжтов медаки дает среда 199, а фундулюса - более сложный раствор. Для ооцитов мешкожаберного сема также можно использовать раствор Рингера и его моди­ фикации, но ооцнты созревают в более высоком проценте случа­ ев в солевом растворе, являющемся основой среды Вольфа ж Таблица 2 Состав сред, используемых для инкубации ооцитов костистых рыб*

–  –  –

»

Stimm, 1978; •стахынх сред - OO Kpler, Bienlars, 1978b .

X u в мши

•w Квммби /Goswami, Sundararaj, 1971Ъ/. Для ооцитов вьша, се­ ребряного карася и карпа также желательно использовать более комплексные среды, чем раствор Рингера /Саат, I98U, 1983, 1985 и неопубл. данные Т.В. Саата/ .

2) Солевые' растворы, по ионноцу составу соответствующие сыворотке крови рыб: твзз, свзз, солевой раствор Кортланда, солевой раствор для ооцитов камбалы-калкана (табл. I и 2) .

Однако применение растворов этой группы может и не дать положительного результата: ооциты фундулюса в солевом раст­ воре, соответствующем по составу сыворотке крови того же ви­ да, не созревают /Wallace, Selman, 1978/ .

3) Солевой раствор с глюкозой, лежащий в основе среды Вольфа и Квиыбк, выработанной для инкубации in vitro тканей костистых рыб, оказался наиболее подходящим для созревания ООЦИТОВ мешкожаберного сома /Goswami, Sundararaj, 1971b / .

Однако ооциты фундулюса в этом растворе не созревают/Wallace, Selman, 1978/ .

4) Солевые растворы для культивирования тканей млекопи­ тающих и среда 199 на основе этих растворов (раствор Хенкса, среда 199 на растворе Хенкса или Эрла); в среду 199 ино­ гда добавляют 10-20% сыворотки крови теленка или крупного рогатого скота (табл. I) .

Установлено, это ооциты вьюна, серебряного карася и кар­ па созревают в разных солевых растворах и средах, принадле­ жащих ко всем перечисленным группам, но по ряду показателей (процент созревших и овулировавших ооцитов, приобретение со­ зревавшими ооцитамн способности к эмбриональному развитию и др.) наиболее благоприятными являются среды последней группы

- I99C (среда 199 на основе раствора Хенкса с добавлением 20% сыворотки крови крупного рогатого скота) и MI99C (моди­ фицированная среда I99C: к среде 199 добавляют 20% дистилли­ рованной воды и затем бикарбоната натрия до концентрации 2 г/л и сыворотку) /Саат, 1980, 1983, 1985 и неопубл. дан­ ные/ .

Существенным является также осмотическая концентрация /Wallace, Selman, 1978/ и ионная сила среды /Гончаров, 1978, Саат, 1983, 1985/. Так, ооциты фундулюса созревают только в гипотоничной среде /Wallace, Selman, 1978/. В опытах с ооцитами осетровых рыб было установлено, что ооциты некоторых самок созревают под действием гонадотрошша лишь при условии повышения ионной силы среды (что достигается путем увеличе­ ния концентрации бикарбоната натрия). При этом снижается мишшахьн&я концентрация гонадотрошша, вызываемая созрева­ нне ооцитов. При высокой концентрации бикарбоната натрия (2-3 г/л) ооциты иногда созревает в среде, не содержащей гормонов. В то же время, под действием прогестерона ооциты созревают и в растворе Рингера со стандартным содержанием бикарбоната натрия /Гончаров, 1978/. Аналогичные данные были нами получены для костистых рыб /Саат, 1983, 1965/ .

В некоторых случаях в раствор Рингера добавляли яичный альбумин (осетровые рыбы - Скоблина, 1970; вы» - Скоблина, 1973). Было показано, что альбумин снижает зффектнвну® кон­ центрацию гонадотрошша /Гончаров, 1978/, однако он не явля­ ется необходим«! для созревания ооцитов (осетровые рыбы Гончаров, 1978; костистые рыбы - iwaoetau, 1973; Саат, I960) .

Джя инкубации ооцитов использует растворы с pH от 7,2 до 8,3 (табл. I); это достигается добавлением в среду НаНСО^, Нереа-НаОН буфера жли фосфатного буфера, а также инкубацией под атмосферой с увеличенным содержанием COg /Jalabert, 1976, 1978; Wallace, Selman, 1978; HIrose, 1980/* При повышена pH среды концентрация суспензии гжпофжза, вызывавшая созревание ооцитов, умвньмается в 2-3 раза /Jala­ bert, 1976/ .

Антибиотики. В ряде случаев в среду инкубации добавляли антибиотики, обычно пеяицеллин и стрептомицин (табл. I). При проведении опытов в стерильных условиях добавление антибио­ тиков, по-видимоф, отгоне .

Температура и ПРОДР—»«™»сть инкубации. Температуру, при которой проводят опыты in vitro, выбирает в соответствии с температурой воды во время естественного нереста; обычно опыт проводят при постоянной температуре (табл. I) .

При проведении опытов необходимо учитывать, что продол­ жительность созревания ооцитов зависит не только от темпера­ туры, но я от исходного состояния ооцитов /Таллинна,1978;

Саат, 1983; Epler, 1981 а, Ъ, с и др./ и от используемого гормона, его концентрации и активности /Кирненблат, 1961;

Бурлаков, 1976; Бурлаков, Рькка, 1961; Goswami, Sundararaj, 1971а; Sundararaj, Goswami, 1971 и др.) .

Объем раствора и число оопигов. Число фолликулов дефини­ тивного размера на I мл среды инкубации в опытах резнях ис­ следователей сильно варьирует (табл. I), например, у выова от 10-20 /Скоблина, 1973/ до 78-96 /Бурлаков, Рьжка, 1961/, у радужной форели - от 2 /Сакун, Гуреева-Преображенская, 1975/ до 13 /Jalabert, 1976/. Эти различия несомненно должны,9 з Оказывать влияние на результаты опыта, поскольку они будут отражаться на концентрации кислорода и продуктов жизнедея­ тельности в среде, а также на доступности горюна. Так, ус­ тановлено, что созревание ооцитов зависит не от концентрации прогестерона в среде, а от его концентрации на ооцмт (Belle et ai., 1976} Marot et el., 1977/ .

Tltro фрагментов яичника и изолированныт ФОЛЛИКУЛОВ. Обычно in vitro инкубирует фрагменты яичника, содержащие от нескольких до э-100 ооцитов дефинитивного раз­ мера (табл. I). Имеются данные, что величина инкубируемого фрагмента имеет существенное значение для результатов опыта .

У вьюна процент созревших ооцитов бел наибольшим при куль­ тивирования фрагментов, содержащих по 5-10 ооцитов /Саат, 1980/, у карта - при культивирования фрагментов, содержащих около 5 ооцитов дефинитивного размера (наши неопубл. дан­ ные) в обоих случаях доля созревших ооцитов по мере увели­ ;

чения числа ооцитов в фрагменте существенно снижалась; в среде 1990 это снижение было менее существенным, чем в соле­ вых растворах (в твза у вьюна и в растворе Кортлаеда у кар­ па). У етжх видов изолированные фоллшдглн созревали в отно­ сительно невысоком проценте случаев, что может быть обуслов­ лено их более частым механическим повреждением при изоляции .

В тех случаях, когда нерест носит порционный характер и порции ооцитов созревают с интервалом в сутки (медака) или в несколько суток (колпаки), для инкубации in vitro отбирают фолликулы строго определенного диаметра. Фолликулы с не­ сколько меньшим диаметром (не завершившие вителлогенеэ) либо еще неспособны созревать /Wallace, Seinen, 1978, 1979/, либо созревают атипично /iwamatsu, 1978Ъ/, наоборот, фолликулы с большим диаметром уже стимулированы к созреванию в теле сам­ ки .

Сравнение созревания ооцитов во фрагментах яичника и в изолированных фолликулах проведено на амурском вьше. У это­ го вида ооциты в изолированных фолликулах под вл$ш«ем "он&дотропинов вообще не созревают; под влиянием стеу/дккх гор­ монов они созревают, но значительно реже, чем во фрагментах яичника /Iwamatsu, Katoh, 1978/ .

Критерии созревания и овуляции Наиболее часто критерием созревания in vitro является разрушение зародитевого пузырька (ЗШ. У многих видов кос­ тистых рыб разрушение ЗП может быть установлено просто - пу­ тем просмотра живых ооцжтов под бинокулярной лупой. Нередко использую? также растворы, содержащее уксусную кислоту; в них желток становится провранным, а кариоплазма белеет, * ЗП (если он имеется) оказывается четко различили (Сакун, Гуреева-Преображенская, 1975; Бурлаков, Река, 1981; Дуварова, 1982; Goetz, Bergman, 1978Ъ/ .

Необходимо отметить, что разрушение ЗП еще не свидетель­ ствует о том, что процесс созревания ооцита протекает нор­ мально .

У медаки ооциты диаметром 750 мкм под влиянием стеро­ идных гормонов созревает нормально по целому раду показате­ лей. У более метжит ооцитов (диаметром 700-749 мкм) ЗП раз­ рушается, однако,такие ооциты не гидратируются, не становят­ ся прозрачными и не приобретают способности к осуществлении кортикальной реакции /Iwaeateu, 1978Ъ/. У меикоиаберного се­ ма разрушение ЗП свидетельствует также лимь о начале созре­ вания, но не является гарантией его завершения /Goswami, Sundararaj, 1971а, Ъ/. При созревании lnvvitro ООЦИТОВ чер­ номорской камбалы-калкана мейоз идет только до стадии ана­ фазы I Даликина, 1978/. В некоторых созревающих in vitro ооцнтах вьюна и однополой формы серебряного карася мейотнческие преобразования останавливаются вскоре после разрдпеиия ЗП на стадии сформированной карносферы /Саат, 1982, 1983/ .

В созревающих in vitro ооцитах двуполой форм серебряного карася мейоз блокировался на стадии метафаан I; такие ооциты приобретали способность к осуществлению кортикальной реакции и к цитотомни /Саат, 1983/ .

Достижение созревающими in vitro ооцитами стадии мейоза, характерной для зрелого яйца (у двуполых видов костистых рыб

- стадии метафазы II), установлено лишь для нескольких видов;

медаки /laamateu et ai., 1976/, амурского вьюна /Iwamatsu, Katoh, 1976/, вьюна /Саат, 1982/, однополой /гиногенетической) формы серебряного карася /Саат, 1983/, карпа /Сакун, Гурееза-Дреображенская, 1975/ н мешкожаберного сома /Goswami, Sundararaj, 1971а/. Однако, поскольку цктоплазматнческие и ядерные преобразования в процессе созревания не связаны между собой причинно /см. Детлаф, 1977/, достижение ооцитами метафазы II таже еще не свидетельствует о йолноценности со­ зревания. Действительно, зародьши, развивающиеся из созрев­ ших in vitro ооцитов амурского вьюна, достигают только ста­ дии морулы /Iwamatsu, Katoh, 1978/ .

Из сказанного очевидно, что разрушение ЗП не может слу­ II 3* жить единственным критерием созревания ооцитов, и этот кри­ терий должен быть дополнен другими. В качестве таких допол­ нительных критериев разными авторами были использованы: со­ зревание кортекса ооцита (ооциты в процессе созревания ста­ новятся полупрозрачными, и кариоплазма, отличающаяся по цве­ ту от цитоплазмы, равномерно распределяется в аншальной об­ ласти) слияние желточных включений и жировых капеь, гидра­, тация ооцитов (табл. I). Кроме морфологических, необходимо использовать и другие критерии, в первую очередь, приобрете­ ние ооцитами способности к нормальному развитию .

Лишь в некоторых случаях - для медаки /Iwamatsu, 1974$ Iwamatsu et ai., 1976/, вына /Саат, 1980, 1982/ и карпа /Epler, 19814 и наши неопубл. данные/ показано, что созрев­ ший in vitro ооцит имеет строение зрелого яйца, способен ак­ тивироваться и при осеменении нормально развиваться до ста­ дии вылупления .

Критерием овуляции служит освобождение ооцита от фолли­ кулярной оболочки; однако ооцит может освободиться от фол­ ликулярной оболочки и в результате ее механического повреж­ дения. Чтобы разграничить зги явления, Гуреева-Преображенская (1978) считала оаудировавшими лишь те ооциты, оболочки которых после выхода из них ооцитов стягивались и станови­ лись более компактными. Случаи, когда фолликулярная оболочка оставалась растянутой, не учитывали .

Созревание ооцитов костистых рыб in vitro при разных гормональных воздействиях Ствпоипные ГОРМОНЫ. Ооциты большинства изученных видов костистых рыб способны созревать in vitro под влиянием широ­ кого спектра стероидов, принадлежащих к 3 группам: прогесте­ рон и его аналоги, кортикостероиды и андрогены (желтый окунь

- Goetz, Bergman, 1978b, Goetz, Theofein, 1979; ручьевая фо­ рель - Goetz, Bergman, 1978b; вьюн - Гуреева-Преобракенская, 1978; Саат, 1980; амурский вью - Iwamatsu, Katch, 1973; меi|uca - Iwamatsu, 1978а; карп - Epler, 1978b). В то же время )Ьциты мешкожаберного сома созревают в высоком проценте слуаев лишь под влиянием некоторых кортикостероидов; прогесте­ рон и его аналоги вызывают созревание меньшего числа ооци­ тов, а андрогены практически неэффективны /Goswami, Sundara­ raj, 1971b, J974; Sundararaj et ai., 1979/ .

Наиболе#аффективными в опытах с ооцитами разных видов костистжх рнб оказались ода* ж те *а гормоне (табл. 3). Са^ «ем эффективны* (внзываицнм cosреванше в наименьией концент­ рации) во всех слупил оказался 17еС-оксн-20/5 -джгждропрогестерон (табл. 3) .

Гонадотрошша ГОШЯШ. Ооцнты костистых рыб яр* нниубац*ж с добавленное еуспензее гипофизов рыб * очищенных гонадртрошшов рыб и нлежоеатаещв созревают in vitro, как пра­ вим» значительно режо, чей под влжяниеы стеровдов /Goawaei, Sundararaj, 1971Ъj Jalabert, Breton, 1973; Jalabert et ai., 1973; Goets, Berg**, 1978a, b;Iwamateu, Katoh, 1978; I^peева-Ореобрахеесжал, 1776; Caа», 1980, 1983, 1966/; лижь в опытах Талакеяе! /1978/ ев камбале-калкане получей противо­ положны* результат. Горнею, аффективнее in viто, in vitro могут быть Нвеффеи»МИШК /Кириенблат, 1961; Sundararaj, Goawaei, 1977У .

Гормоны, эффоелиниз и еееффепиввые аре индукции соаревания ооцитов нзкоторик иидсе костистых рнб, приведем в табл. 4 .

Эффективность суспензии гипофизов зависит от среды жжхубации: в средах с увеличено« се*ериаиевн бикарбоната натрия процент созревиех оецетев у серебряного карася /Саат, 1965/, вьюна и карпа /Саат, не опубл./ значительно увеличивался .

Комбинированное воелеШстиее гонадотт*"™«. • стероидам гормоном. Кортииостероида в концентрациях, неэффективных или малоэффективных при ищгири еоереванни ооцитов, аначительно повыиают эффективность ремадотрошюге гормона, т.е. иаблццается синергизм в дейотмш гормонов этих диух групп /Jalabert, 1976; Sundararaj et ai., 1979; Vallaee, Seinem, 1980; Сайт, 1983, 1985/. Установлено такие сннергидное действие суспен­ зии гипофизов сазана и 17оС-оксипрогестерона при индукции созревания ооцитов серебряного караси /Сaar, 1985/ .

В отличие от кортикостероидов «строганы снижают эффек­ тивность гонадотрошша /Jalabert, 1976; Sundararaj et ai., 1979/ .

Тестостерон у радужной форели увеличивает, а у иеекожаберного сома снижает эффективность гонадотрошша /Jalabert, 1976; Sundararaj et ai., 1979/ .

–  –  –

^ Вызывали созревание 0-1056 ооцитов .

Bpler, Bieniarz, 1978a; Goetz, Bergman, 1978b; Iwamatsu, Katoh, 1978; Ree, 1977; Wallace, Selman, 1978, 1979; Nagahama et ai., 1980; Саат,1985/ .

У желтого окуня ооциты хорошо овулируют in vitro под влиянием некоторых стероидных гормонов; среди них наиболее эффективен 17,^ -окси-20уЗ -дигидропрогестерон. Кортикостероиды и метилтестостерон значительно менее аффективны, чем про­ гестерон и его производные. Многие овулировавшие ооциты это­ го вида были несозревшими /Goeta, Bergman, 1978b; Goetz, 1979; Goetz, Theofan, 1979/ .

При работе с ооцитами выша также выяснилось, что про­ гестерон и его производные более эффективно вызывают овуля­ цию, чем кортикостероиды и андрогены /Гуреева-Преображенская, 1978; Саат, 1980/. У вьюна овуляция ооцитов под влиянием [фогестерона в разных средах происходила с разной частотой;

наиболее благоприятной для овуляции ооцитов оказалась среда I99C /Саат, 1980, 1983/ .

Данные для медаки противоречивы. В однчт случаях ооциты хорошо огул,'ровали, причем наиболее эффективными среди сте­ роидов были гидрокортизон /Hirose, 1972/ и кортизон /Rirose, 1976/. В других случаях ооциты не овулировали /Iwamateu, 1974, 1978а; Hirose, 1980/. Разные результаты опытов обус­ ловлены, по-видимому, различиями в исходном состоянии ооци­ тов .

Гонадотропные гормоны. Ооциты некоторых видов рыб, со­ зревшие in vitro под влиянием гонадотропинов, овулируют .

Эффективными индукторами овуляции оказались хориогонин и СЮ для амурского вьена Awamatsu, Katoh, 1978/, ЛГ - для карпа и вьюна /Бурлаков и Рита, 1981/, суспензия гипофизов сазана и хориогонин - для вьюна /Саат, I960, 1983/, очищенный гонадотропин лосося. ЛГ, $СГ, хориогонин и СЮ - для медаки /Hi­ rose, 1971, 1976; Hirose, Donaldson, 1972; Hirose, Hiroee, 1972; iwamatsu, 1978b), суспензия гипофизов своего вида для Hypseleotris galii /Mackay, 1975/, одновременное воздей­ ствие суспензией гипофизов карпа и хориогонином - для евро­ пейского угря /Epler, Bieniarz, 1978а/ .

Овуляцию in vitro не удалось подучить у лососевых рыб /Jalabert, 1976; Hagahama et ai., 1980/ и у'желтоперого су­ дака /Goetz, Bergman, 1978а/.У желтого окуня некоторые гона­ дотропины вызывали овуляцию, но овулировали только несо­ зревшие ооциты /Goetz, Bergman, 1978а/. Гонадотропины оказа­ лись малоэффективными при индукции овуляции и в случае сере­ бряного карася /Саат, 1985/ .

I

–  –  –

I Созревание ооцитов протекало вначале in vivo, затем - in vitro Ооциты созревали и овулировали in vitro °Ооциты созревали in vivo, овулировали in vitro Прочерк означает отсутствие данных .

Гонадотропины были более эффективным* при индукции ову­ ляции, чем стероиды. В частности, они вызывали овуляцию в тех случаях, когда стероиды были полностью неэффективными (Waekay, 1975; Epler, Bieniarz, 1978а; Iwamatsu, 1978b; Iwa­ matsu, Katoh, 1978/. 6 нашит опытах хориогонин и гипофиз са­ зана вызывали овуляцию значительно большего числа ооцитов вьюна, чем прогестерон /Саат, 1980, 1983/ .

Комбинированное воздействие гонадотропным и стероидным гормоном оказалось наиболее эффективным при индукции овуля­ ции ооцитов вьюна и серебряного карася /Саат, 1980, 1983, 1985/. Так, при комбинированном воздействии прогестероном и хориогонином или суспензией гипофизов сазана в среде I99C, MI99C и в растворе Эрла с сывороткой закономерно окулировало около 90% ооцитов вьюна .

Поостагландины. В последние годы появлюсь немало данных о том, что у рыб, так же как у млекопитающие /им. LeMaire et ai., 1979/, сокращение фолликула при овуляции вызывается простагдавдинами (табл. 5). Было показано, что простатландины (в частности, простагландин вызывсои у костистых рыб овуляцию как in vivo, так и in vitro. Ингибитор их синтеза индометацин - подавляет овуляцию; это подавление обратимо и может быть снято добавлением экзогенного простагландиыа .

Стероидные и гонадотроиные гормоны эффективны лишь в оп­ ределенном диапазоне концентраций. Слишком большие концент­ рации могут частично или полностью подавлять созревание или овуляцию ооцитов (.созревание под влиянием стероидов - Goetz, Bergman, 1978b; Iwamatsu, 1978a; созревание ПОД влиянием ГОнадотропинов - Бурлаков, Рышка, 1981; Бурлаков, Хапчаева, 1982; Саат, 1985; овуляцию под влиянием стероидов - Hirose, 1976; Goetz, Bergman, 1978b; Саат, 1980, 1983; овуляцию под влиянием гонадотропинов - Hirose, 1971, 1976; Бурлаков, Рыш­ ка, 1981; Бурлаков, Хапчеева, 1982). Механизм такого подавле­ ния не изучен .

Литература

Бурлаков А.Б. Некоторые вопросы гормональной стимуляции со­ зревания карповых рыб при искусственном разведении: Автореф. дис.... канд. биол. наук. - М.: МГУ, 1976. с .

Бурлаков А.Б.. Рышка Ф.Ю. Влияние лютропинов на созревание и овуляцию ооцитов некоторых карповидных рыб in vitro и in v v * - Пробл. эндокрин., 1981, т. 27, » 3, с. 72-77 .

lo 5* Бурлаков А.Б., Хапчаева Е.В. Изучение половой специфичности гипофизарных гонадотропинов русского осетра Acipenser gueldenetaedti Brandt! (Acipenaeridae) I. Биологическое действие гонадотропинов, обладающих малой электрофоретической подвижностью, на созревание и овуляцию ооцитов вьюна Miegurnus fossilis (Cobitidae). - Вопр. ихтиол., 1982, т. 22, вып. 4, с. 656-664 .

Гончаров Е.Ф. Влияние состава среды культивирования на спо­ собность фолликулов осетровых рыб реагировать созревани­ ем на действие гонадотропных гормонов. - В кн.: Вопросы раннего онтогенеза рыб: Тез. докл. II Всесоюзной конфе­ ренции.Киев: Наукова думка, 1978, с. 77-78 .

Гуреева-Лреображенская Е.В. Экспериментальное изучение овариального фолликула рыб и его радиочувствительности в связи с анализом корреляции иехду созреванием и овуляцицией. - В кн.: Радиация и проблемы размножения и роста рыб. Труды Биол. н.-и. ин-та ЛГУ, 1978, # 28, с.II2-I25 .

Детлаф Т.А. Становление организации зрелого яйца у амфибий и рыб на заключительных стадиях оогенеза,в период созрева­ ния ооцита. - Б кн.: Современные проблемы оогенеза.

М.:

Наука, 1977, с. 99-144 .

Дузарова A.C. Созревание ооцитов толстолобика Hypophthalmiohthys molitrix (Vai.) (Cyprinidae) после гормональных воздействий. - Вопр. ихтиол., 1982, т. 22, 5, с. 804Казанский Б.li. Вьзновая единица (BE) для изучения гонадогропной.остивности препаратов гипофиза рыб.- Труды /Ла­ боратория основ рыбоводства. Л., 1У49, т. 2, с. 29-36 .

Казанский Б.Н., Нусенбаум Л.М. Вьюн (Miegurnus fossilis L.) как объект для определения гонадотропной активности ги­ пофиза рыб. - Труды/Лаборатория основ рыбоводства. Л., 1947, т. I, с. III—120 .

Киршенблат Я.Д. Действие кортизола на яичники вьюна. - Бюлл .

экспер. биол. и медицины,1959, т. 47, 4, с. 108—112 .

Киршенблат Я.Д. Физиологический механизм регуляции процессов созревания ооцитов и овуляции у вьюна Misgurnus fossi­ lis. - Вопр. ихтиол., 1961, т. I, I, с. 166-193 .

Ромейс Б. Микроскопическая техника: Пер. с нем. - М.: Изд-во иностр. лит, 1953. - 718 с .

Саат Т.В. Созревание и овуляция ооцитов вьюна in vitro в разных средах и при разных гормональных воздействиях. Онтогенез, 1980, т. II, 5, с. 545-554 .

Саат fr.B. Хронология созревают ооцитов вьша и становление у них способности к развитию. - Онтогенез, 1982, т. 13, I 3, с. 257-265 .

Саат Т.В. Закономерности созревания ооцитов у костистых рыб (на примере вьюна и серебряного карася): Автореф. дне .

... канд. биол. наук. - 11.: Изд-во ин-та биологии разви­ тия, 1983. - 21 с .

Саат Т.В. Созревание и овуляция ооцитов серебряного карася in vitro в разных средах и прй разных гормональных воз­ действиях. - Онтогенез, 1985, т. 16, » 3, с. 254-259 .

Саюгн 0.* .

. Гуреева-Доеображенская Е.В. Изучение созревания ооцитов костистых рыб: Методика инкубации и пути анализа результатов. - Веста. Ленингр. ун-та, 1975, * 15, с. 15Слгобдня М.Н. Экспериментальное изучение роли ядра ь процес­ се созревания ооцитов амфибий и осетровых рыб: Автореф .

дне.... канд. биол. наук - М.: Изд-во ин-та биологии развития, 1970. - 23 с .

Скоблина М.Н. Созревание ооцитов вы»а in vitro под влиянием хориогонина. - Онтогенез, 1973, т. 4, » 3, с. 309-311 .

Таликина И.Г. Исследование генеративной функции яичников черноморской камбалы-калкана Scophthalmua maeoticua (Pallas) в связи с вопросу* ее разведения: Автореф.дне .

... канд. биол. наук. - 1.: Изд-во ЛГУ, 1978. - 16 с .

Дедооов К.Е. Реакция стимуляции созревания ооцитов ерва Aqerina cernua (L.) вне тела самок как тест для испытания гонадо*ропинов рыб. - Вопр. ихтиол., 1977, т. 17, » 2, с. 312-319 .

Ballet R.. Harot. J.. Ogon R. Recherohes aur la maturation de 1'oocyte de lenopus laevis. L'entre de la progesterone est ndcessaire pour la maturation. - C.R. Acad. Sc. Paris, 1976, т. 283, p. 175-178 .

Epler P. Effect of steroid and gonadotropic hormones on the maturation of carp ovaries* Bart П. Effect of fleh and mammalian gonadotropins on the Maturation of oarp oocytes In vitro. - Pol. Aroh. Hydrobiol., 1981a, r. 28, Ш 1, p .

95-102 .

Epler P. Effect of steroid and gonadotropic'hormones on the Maturation of oarp ovaries» Part Hi. Effect of staretM hormones on the oarp oocyte Maturation In vitro. - Pel .

Aroh. Hydrobiol., 1981b, v. 28, E 1, p. 103-110 .

Epler P. Effect of steroid and gonadotropic hormones on the maturation of carp ovaries. Part IV. A combined action of steroid hormones and HCG or fish hypophysial homo­ genste on carp maturation in vitro. - Pol. Arch. Hyd­ robiol., 1981c, v. 28, N 1, p. 111-117 .

Epler ?. Effect of steroid and gonadotropic hormones on the maturation of carp ovaries. Part V. Ovulation, ferti­ lization and embryonal development of carp oocytes in vitro. - Pol. Arch. Hydrobiol., 1981d, v. 28, N 1, p .

119-125 .

Epler F. Bieniarz К. In vitro ovulation of european eel(Arguilla anguilla L.) oocytes following in vivo stimula­ tion of sexual maturation. - Ann. Biol. Anim. Bioch .

Biophys., 1978a, v. 18, N 4, p. 991-995 .

Epler ?.. Bieniarz K. Hodowla oocytw ryb in vitro jako metoda badan nad hormonalnym mechanizmem ich rozrodu.PrBeglad literatury swiatowej. - Roczniki nauk rolniczych, ser. H, 1978b, t. 98, z. 4, 175-193 .

Goetz F.W. The role of steroids in the control of oocyte final maturation and ovulation in yellow perch (Perca flavescens). - Proc, Indian Nat. Sei. Acad., 1979, v .

B45, N 5, p. 497-504 .

Goetz F.W.. Bergman H.Ь. The in vitro effects of mammalian and piscine gonadotropins and pituitary preparations on final maturation in yellow perch (Perca flavescens)and walleye (Stizostedion vitreum). - Canad. J. Zool.,1978a, v. 56, N 2, p. 348-350 .

Goetz F.W.. Вегдтап Н.Ь. The effects of steroids on final maturation and ovulation of oocytes from brook trout (Salvelinus fontinalie) and yellow perch (Perca fla­ vescens). - Biol. Reprod., 1978b, v. 18, N 2, p. 293Goetz F.tf.. Smith D.G. In vitro effects of theophylline and dibutyryl adenosine 3':5'-cyclic monophosphoric acid on spontaneous and prostaglandin Fg^-induced ovulation of brook trout (Salvelinus fontinalis) oocytes. -Biol.Reprod., 1980, v. 22, Suppi. 1, p. A114 .

Goetz F. W.. Theofan G. In vitro stimulation of germinal ve­ sicle breakdown and ovulation of yellow perch (Perca flavescens) oocytes. Effects of 17oc-hydroxy-20/a-dihydroprogeaterone. - Gen. Compar. Endocr., 1979, v. 37, N 3, p. 273-285 .

Goswami S.V.. Sundarara.i B.I. Temporal effects of ovine lu­ teinizing hormone and desoxycorticosterone acetate on maturation and ovulation of oocytes of the catfish,Heteropneustes fosailis (Bloch): An in vivo and in vitro study. - J. Exp. Zool.,1971a, v. 178, N 4, p. 457-466 .

goswami S.V.. Sundarara.i B.I. In vitro maturation and ovu­ lation of oocytes of the catfish, Heteropneustes fos­ siile (Blosh); Effects of mammalian hypophyseal hormo­ nes, catfish pituitary homogenate, steroid precursors and metabolites, and gonadal and adrenocortical ste­ roids. - J. Exp., Zool., 1971b,T.178, H 4, g.'467-478 .

Goswami S.V. Sundarara.i В.I. Effects of С1д, and C21 .

steroids on in vitro maturation of oocytes of the cat­ fish, Heteropneustes fossilis (Bloch). - Gen.Compar.Etdocr. 1974, v. 23, i. 282-285 .

Hirose K. Biological study on ovulation in vitro of fish.I .

Effects of pituitary and chorionic gonadotropins on ovu­ lation in vitro of medaka, Oryzias latipes. - Bull.Ja­ pan. Soc. Soi. Pish., 1971, v. 37, N 7, p. 585-592 .

Hirose K. Biological study on ovulation in vitro of fish.IV .

Induction of in vitro ovulation in Oryzias latipes us­ ing steroids. - Bull. Japan. Soc. Sei. Fish., 1972, v .

38, H 5, p. 457-461 .

Hirose K. Endocrine control of ovulation in medaka (Oryzias latipes) and ayu (Plecoglossus altivelis). - J. Fish .

Res. Bd. Canada, 1976, v. 33, N 4 (Pt 2). p. 989-994 .

Hirose K. A bioaasay for teleost gonadotropin using the ger­ minal vesicle breakdown (GVBD) of Oryzias latipes oo­ cytes in vitro. - Gen. Compar. Endocr., 1980, v. 41, N 1, p. 108-114 .

Hirose K.. Donaldson E.M. Biological study of ovulation in vitro of fish. III. The induction of in vitro ovula­ tion of Oryzias latipes oocytes using salmon pituitary gonadotropin. - Bull. Japan. Soc. Sei. Fish., 1972, v .

38, N 2, p. 97-100 .

Hirose K.. Hirose H. Biological study on ovulation in vitro of fish. II.Differences of ovulation rates in Oryzias latipes at the various starting hours of incubation. Bull. Japan. Soc. Sei. Fish., 1972, v. 38, N 1,p.33-42 .

Iwamatsu T. Studies on oocyte maturation in the medaka,Ory­ zias latipes. Improvement of culture medium for oo­ cytes in vitro. - Japan. J. Ichthyol., 1973, v. 20,N 4, p. 218-224., 6* Iwamatau Т. Studies on oocyte maturation of the medaka. Ory­ zias latipes. II Effect of several steroids and calci­ um ions and the role of follicle cells on in vitro ma­ turation. - Annot. Zool. Japon., 1974, v. 47, H 1,p.30Iwamatsu Т. Studies on oocyte maturation of the medaka, Ory­ zias latipes. V. On the structure of steroids that in­ duce maturation in vitro. - J. Bxp. Zool., 1978a,v.204, К 3, p. 401-408 .

Iwamatsu Т. Studies on oocyte maturation of the medaka, Ory­ zias latipes. VI. Relationship between the circadian cy­ cle of oocyte maturation and activity of the pituitary gland»— J. Exp. Zool., 1978b, v. 206, N 3, p. 355-364 .

Iwamatsu T. Studies on oocyte maturation of the medaka, Ory­ zias latipes. VIII. Role of follicular constituents in gonadotropin- and steroid-induced maturation of oocytes in vitro. - J. Exp. Zool., 1980, v. 211, N 2, p.231-23% Iwamatsu T.. Katoh T. Maturation in vitro of oocytes of the loach, Miegurnus anguillioaudatus by steroid hormones and gonadotropins. - Annot. Zool. Japon., 1978, v. 51, Я 2, p. 79-89 .

Iwamatsu T.. Ohta V.. Nakayama N.. Sho.ji H. Studies of oo- .

cyte maturation of the medaka, Oryzias latipes. III.Cy­ toplasmic and nuclear changes of oocyte during in vit­ ro maturation. - Annot. Zool. Japon., 1976, v. 49,N 1, p. 28-37 .

Jalabert B. Xn vitro oocyte maturation and ovulation in rain­ bow trout (Salmo gairdneri), northern pike (Bsox luciUB), and goldfish (Carassius auratus). - J. Pish. Res .

3d. Canada, 1976, v. 33, N 4 (Pt 2), p. 974-988 .

Jalabert B. Production of fertilizable oocytes from follicles of rainbow trout (Salmo gairdneri) following in vitro maturation and ovulation. - Ann. Biol. Anim. Bioch.Biophys., 1978, v. 18, N 2B, p. 461-470 .

Jalabert B.. Breton B. In vitro maturation of pike oocytes.Ten. Compar. Endocr., 1973, v. 22, p. 391 .

Jalabert B.. Breton B.. Billard R. Dosage biologique des hor­ mones gonadotropes de poissons par le test de matura­ tion in vitro des ovocytes de truite. - Ann. Biol.Anim .

Bioch. Biophys., 1974, v. 14*, N 2, p. 217-228 .

Jalabort В.. Breton В.. Вгу С. Maturation et ovulation in vitro des ovocytes de la Truite arc-en-ciel, Salmo fairdnerii. - C. R. Acad. Sei. Paris, 1972, v. D 275, N11, p. 1139-1142 .

Jalabert B.. Breton B.. FoBtier A. Precocious induction of ск -ryte maturation and ovulation in rainbow trout(Sal­ mo gairdneri): problems when using 17* -hydroiy-20/з dihydroprogesterone. - Ann. Biol. Anim. Bloch. Biophys., 1978, v. 18, N 4, p. 97^-984 .

Jalabert В.. Вгу C.. Szllsl D.. Portier A. Etude comparde de 1'action des hormones hypophyelaree et etroides aur la maturation in vitro des ovocytes de la truite et du carassin (poissons teleosteens). - Ann. Biol .

Anim. Bloch. Biophys., 1973, v. 13, hors-sirie.p. 59Jalabert B.. Szllsi D. In vitro ovulation of trout oo­ cytes: effects of Prostaglandine on smooth-evscle-likB cells of the theca. - Prostaglandins, 1975, v. 9,N 5, p. 765-778 .

Kapur K. Effects of Indomethao1л on ovulation and spawning in exotic fish Cyprinus carpio. - Indian J. Exp.Zool„ 1979, v. 17, N 5, p. 517-519 .

Kawanmra T.. Motonpjta T. On artificial ovulation In the spinous loach. - Japan. J. Ichthyol., 1950, v. 1,11 1, p. 1-7 .

LeMaire W.J. Clark M.R.. Marah JVM. Biochemical mechanise .

of ovulation. - In: Human ovulation /Ed. B.S.B. Hates .

- Amsterdam e.a. Elsevier/North-Holland biomed..Press, :

1979, p. 159-175 .

Маскам H.J. The reproductive cycle of the firetail gudgeon, Hypseleotris galli. IV. Hormonal control of ovulation .

- Austr. J. Zool., 1975, v. 23, N 1, p. 43-47 .

Marot J.. Belle R.. Ozon R. In vitro facilitation of Xenopus oocyte maturation by subthreshold doses of proges­ terone. - Develop. Biol., 1977, v. 59, N 1, p. 91-95 .

Masui Y.. Clarke H.J. Oocyte maturation. - Int. Rev.Cytol., 1979, v. 57, p. 185-282 .

Sagahama Y.. Kagawa H.. Taahlro P. The in vitro effect of various gonadotropins and steroid hormones on oocyte maturation in amago salmon Oncorhynohus rhodurus and rainbow trout Salmo gairdneri. - Bull. Japan. Soc.Soi .

Pish., 1980, v. 46, N 9, p. 1097-1102 .

Orata H.. Ношига Т.. Hat* И. Prostaglandin ?2^ changes in­ duced by ovulatory stimuli in the pond loaoh, Klagurnus anguillioaudatus. - Bull. Japan, Soo. Sei. И.eh., 1979, v. 45, N 7. p. 929-931 .

Нее Q.B« van.In vivo and in vitro studies of the pituitaryovary axle in the tebrafish (Brachydanio rerio Няя, Buch.). Thesis, State Univ. Utrecht, 1977. - 140 p .

3ingh A.K.. 3ingh T.P. Bffect of cloeid, sexovid and pros­ taglandins on induction of ovulation and gonadotropin secretion of a fresh eater oat fish. Heteropneustee fossilie. - Bndoor., 1976, Bd. 68, H. 2, S. 129-16* Stacev I.-*T1 ^"^tT ят Effects of indomethacin and Prostag­ landine on ovulation of goldfish. - Prostaglandins, 1975, v. 9, p. 597-606 .

SundararaJ B.I.. Qownsi 3.Y. In vivo and in vitro induc­ tion of maturation and ovulation in oocytes of the cat­ fish, Heteropneustes fossiile (Bloch), with protein and steroid hoieones. - In« Hormonal Steroids(Proe. 3rd Int. Congr., Hamburg, 1970). Amsterdam, 1971, p. 967Яаллмтшялл B.I..8*nmml B.T. Effecte ef e*ine luteiniiing he—owe and porcine adrenooortlcotropin on maturation fossiile • of oocytes of the catfish, Heteropnouetee (Bloch), la ovary-interrenal coemlture. - Oen. Cospar .

Bndoer.» 19?*» v. 23, p. 276-281 .

Sundararaj B.I. Qoewmmi S.V. Hormonal regulation of in vivo and In vitro oocyte maturation in the catfish, Heteropneustes fossilis. - Gen. Compar. Bndoor., 1977,v. 32, В 1, p. 17-29 .

Sundarara.l В.I.. Goswami S.Y.. Donaldson B.M. Effect of sal­ mon gonadotropin on in vitro maturation of oocytes of a catfish, Heteropneustes foesilis. - J. Pish. Res.Bd .

Canada, 1972, v. 29, N 4, p. 435-437 .

3undarara.1 В.I.. Goswami 3.Y.. Lamba У. Some aspects of oo­ cyte maturation In catfish. - J. Steroid. Biooh.,1979, v. 11, N 1, p. 701-707 .

Wallace R.A.. Selman K. Oogenesis in Fundulus heteroclitus .

I. Preliminary observations on oocyte maturation in vi­ vo and in vitro. - Develop. Biol., 1978, v. 62, Ж 2, p. 354-369 .

Wallace Я.Ju. Selman К. Physiological aapeota of oogeneeie in two epeciee of etioklebacka, Caateroeteue aouleatue I., and Apeltes quadracue (Mitchill). - J. Pieh Biol., 1979, v. 14, Ж 6, p. 551-564 .

Wallace R.A.. Sei ит к. Oogenesis in Pundulua heteroolitua .

II. The tranaition from vitellogeneeia into maturation .

- Gen. Сощрг. Bndoor., 1980, v. 42, p. 308-321 .

Yamaachi К.. v t in vitro maturation of the ooojrtea in the medaka, Oryiiae latipes. - Annot. Zool. Japon., 1973, v. 46, Ж 3, p. 144-153 .

IH VITRO OOCTTB MATRATIO* AJTD OVUUtlOH IK ВСЮ PISH8S

T.Saat Зч—iry A review of methods used to attain fleh oocyte maturation and ovulation in vitro. Compoaition of culture medium, con­ centration of oocytea.eise of Incubated gonadal fragmente, duration of incubation,temperature,nature of the hormonal influence and other faotore which have effect on the results of oocyte incubation are diacuaeed.Criteria of oocyte matu­ ration used by different lnveatigatora are alao critically reviewed .

–  –  –

Среди костистых рыб обнаружено несколько полиплоидных фор*, размножающихся путем естественного гиногенеза; к ним относится и однополая (триплоидная) форма серебряного карася /ом. Черфас, 1979/. Процессы мейоза и оплодотворения у этой формы сильно изменены по сравнение с двуполой формой этого же вида и другими бисексуальными видами рыб /Головинская, 1954; Черфас, 1966, 1969; Саат, 1983/. Оплодотворение осуще­ ствляется спершем другого (близкого) вида, однако преобра­ зования головки спериня в щужской пронуклеус не происходит .

Причины этого явления неизвестны .

Дня выяснения механизма, который у патогенетической фор­ мы приводит к исключению из развития сперматического ядра, нами проведено сравнительное морфологическое и эксперимен­ тальное исследование процесса оплодотворения у двух форм се­ ребряного карася. В данной работе приведены результаты элек­ тронно-микроскопического исследования оплодотворения у двух форм серебряного карася .

Материал и методика

Материал собран во Всесоюзном научно-исследовательском институте прудового рыбного хозяйства в мае-июне 1981 г. В опытах использовали созревшие после гипофизарной инъекции яйца 2 самок однополой и 2 двуполой формы, причем в обоих случаях яйца одной из двух самок осеменяли спермой серебря­ ного карася, второй - спермой карпа .

Для облегчения электронно-микроскопического исследования яйца оплодотворяли полисперто. Для этого у яиц удаляли zona radiate, обрабатывая их проназой (0,1%) или трипсином (0,98) в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,0, температура - 23Для удаления оболочки требовалось 6-7-минутное воздей­ ствие ферментом. Затем яйца многократно промывали в 10%-ном растворе Хенкса; в то* же растворе их осеменяли * в не* же проходило развитие зародшей (при 23-24°) .

Осемененные яйца через разные сроки после осеменения (15^ се«, 1, 8, 12 и 24 мин у двуполой формы, 4, 8 и 32 мин у однополой) фиксировали в течение I часа 2,ЗЬ-ным глутаровым альдегидом на 0,1 М какодилатном буфере (pH 7,3) при 4°, промывали в том же буфере о сахарозой и дофиксировали 1% 0 0 (I час при 22°). Материал заливали в Эпон-812. Ультра­ e 4 тонкие срезы контрастировали уранилацетатом и по Рейнольдсу и изучали под злектронннм микроскопом ЭМВ-100ЛМ .

Параллельно с фиксациями для електрокной микроскопии часть яиц фиксировали для изучения в световом микроскопе (у однополой формы - спустя 8, 16, 24 и 32 мин, у двуполой I, 2, 4, 8, 16 и 24 мин после осеменения). Материал фикси­ ровали жидкостью Санфелжче • заливали (через хлороформ и смеси хлороформа и парафина) в парафин. Серийные срезы тол­ щиной 6 или 10 мхм окраинвали железным гематоксилином по Гейденгайиу или по Фельгену .

Результаты

Образование МУЖСКОГО проюгклеуса у двуполой Формы .

15 сек после осеменения, Сперматические ядра располагается на расстоянии в 2-5 *к* от поверхности яйца. Они имеет гете­ рогенную структуру, видны участки с разной электронной плот­ ностью (рис. I). Ядерная оболочка интактная (рис. I), в не­ которых случаях сразу в нескольких пестах начинается ее де­ зинтеграция. Митохондрии средней части спермия в его время расположены в непосредственной близости от ядра (рис. I) .

На поверхности яйца имеется ieoro коротких микроворси­ нок; в месте проникновения спермия в яйцо михроворсинки зна­ чительно более крупнее, в них иногда даже проникает мито­ хондрии (рте. I) .

I мин после осомаиопия. Происходит дезинтеграция обо­ лочки сперматического ядра: она распадается на мелкие пу­ зырьки, которые рассеиваются в цитоплазме яйца. Электронная плотность спефшамческого ядра уменьшись; в ней различней многочисленнее гранулы; их особенно много в центральной час­ ти ядра (рис. 2) .

В етот срои, а также в срок* 2 и 4 мин после осемене­ ния, в цитоплазме яиц обнаруживается больное число снериатических ядер (рис. 3) .

Рис. I. Сперматическое ядро в цитоплазме яйца двуполой формы серебряного карася через 15 сен после осеменения. Мс - митохондрия спермхя. УВ. 420UO .

–  –  –

12 мин после осемвнеиии. Происходит (путем объединения небольшое цуаырьков звдрплазмаитеского ретжкулуна) образо­ вание ядерной оболочки, которая сформирована не по все* по­ верхности щужского прощукледгеа. Одновременно увеличивается от периферии к центру алежтроня&я плотность кариоплазм нрещужжеуса (рас. 5) .

Митохондрии вокруг лронуклеуса утратили кристн и чисто mmm неправильную фодо. В цитоплазме, окружащей пронуые­ ус, пузырьки располагается параллельными рядами (рас. 6) .

–  –  –

16 мин после осеменения. Эту стадию изучали только в световом микроскопе. Мужские пронуклеусы полностью сформиро­ вались. Образовался и женский пронуыеус; он значительно крупнее мужских .

24 мин после осеменения .

Мужской пронуыеус окружен двой­ ной ядерной оболочкой. Мелкогра­ нулярный матрикс пронуклеуса имеет значительную электронную плотность. Рядом с пронуклеусом обнаруживаются небольшие скопле­ ния материала такой же структуре .

не окруженные ядерной оболочкой (рис. 7) .

Рис. 7. Мужской пронуклеус в яйце двуполой формы сереб­ ряного карася спустя 24 мин после осеменения. Стрелками показана часть ядерного ма­ териала вне пронуклеуса .

УВ. 30000 .

Вокруг пронуклеус* веется иного цуанрьков я ц*егерь, которые иногда содержат иеибраннив структуре; мнтоховдрин в это* облает не встречаигси. В осгаяышх участках яйца жив­ ется митохондрия с хорвие развитее кркстаия .

Судьба головкя сдешии в ДДАДА однополо* ФОРМЫ серебряного кааася.В световой микроскопе яйца однополой форmi научали спустя 8, 16, 24 в 32 шш после осеменения. Во все етн сроки в цктоилазие яиц обнаруживалось небольшое чис­ ло (по 1-3) сперматичесинх ядер, которые не преобразовались в мухекой провуклеус. В яйцах и на их повврооести бит етиечене мелкие (диаиетрои до I нки) •ельгее-нолекятвлыюе гра­ нулы; даннне алектрониой мякроскепии дай» основание предпо­ ложить, что эти грацулн прадстаилямт собой остатки рааруиац та головок спермиев .

Нерву* фиксации джи алектрониой микроскопии проводяли спустя 4 мин после осеенояии. В этот срок в цитоплазме яиц в ряде случаев бнди обнаружевы вакуоли диаметром 4-6 нки, содержащие одно крупное електроноплотное тельце, по форме и размерам соответствуищее головке спермня, ряд мелких алектронопхотннх гранул я eertpiiniiiia струнури (рис. 8). Вакуоли били окружены отдаяьанш алектроноплотннми округлее тель­ цами. представляющими собой, по-видимому, лизосомы. По нее* вероятности,в таких вакуолях происходит разруление головок спершиев. Сцустя 8 мин после осеменения были обнаружены картины, которые можно интер­ претировать как более поздние стадии разруиения головки спериия: в вакуолях диаметров 2-3 мкм имелось скопление электроноплотного материала диаметром до 1 мим (рис. 9) .

–  –  –

Рас. 9. Вакуоля с електроноплотным материалом вблизи поверхностж яйца однополой формы серебряного карася - 8 мин после осеменения. Ув. 50000 .

Подобные картины в яйцах двуполой формы серебряного ка­ рася отмечены не были .

При осеменении яиц, окруженных zona radiata, в цитоплаз­ му яйца однополой формы серебряного карася проникает один сперматозоид; его головка никаких «диммт в световом микро­ скопе изменений не претерпевает (см. Черфас, 1979). Как уже сказано выше, такие сперматические ядра были нами обнаружены и в яйцах, осемененных после растворения zona radiata. По данным электронной микроскопии, такое сперкатическое ядро сохраняло первоначальную структуру и было окружено ядерной оболочкой. Ядро вместе с митохондриями средней части было окружено несколькими слоями мембран и полностью изолировано от цитоплазмы; хвост спермня не обнаружен (рис. 1 ) .

–  –  –

Проникновение головки спермня в яйцо у двуполой формы серебряного карася, так же как и у других костистых рыб /Brummett, Dumont, 1979; Kudo, 1980; Kobayashi, Yamamoto, 1981/, осуществляется быстро: уже спустя 15 сек после осе­ менения спери&тическне ядра располагаются на расстоянии в 2-5 мкм от поверхности яйца. Линь у медаки этот процесс протекает значительно медленнее и занимает при 22-23° около I мин / Iwamateu, ohta, 1978, 1981/. Сперматические ядра, обнаруженные в цитоплазме яйца, бага окружены только ядерной оболочкой; поэтому можно предполагать, что у двуполой формы серебряного карася, как и у других животных, проникновение спермня в яйцо происходит путем слияния плазматических мем­ бран спермня и яйца .

9* Вскоре после протонема** головж* сперма* в яйцо начанаегся дезинтеграция оболочка сперматяческого ядра ж после заверявши »того процесса- деконденсацкл хроматшна. Как * у других животных /см. Longo, 1973/, при »гож увеличивается объем хроматина * уменьшается его алектронная плотность .

Обраеованае ядерной оболочка пронуклеуса у двуполой фор­ мы серебряного карася происходит, как ж у других животных /медажа - Iwamateu, Oht*, 1978; морские ежа - longo, Ander­ eon, 1968; Longo, 1976; Gunkle, 1979; птицы - Okanrara, Niahlyaea, 1978/, путем объединена* небольших пузырьков андоплазматического ретжкулума .

Электронная плотность хроматина уменьшалась вплоть до момента завершения его дежеадеесацав; в дальнейвем н&блвдался обратный процесс - постепенное увеличение электронной плотности хроматина. Пеане думать, что »та изменения обус­ ловлены изменениями в белках хроматина. На морских ежах по­ казано, что сперматическае ядра в цггоплалме яйца теряет гистоны отцовскогб иреаеховдемв*, которые заменяется полипептадама м&тержжскоге проасхождена* /tunkle et *1., 1978;

Longo, Kunkle, 1978; Poo oi* et *1., 1981/. Пв-а*димому, raeтонн сперматжческих ядер серебряного карася и карпа при об­ разовании пронуклеуса также »вменяете* белками материнского происходценая .

При светооптаческом ааученни оплодотворения у двуполой формы серебряного карася установлено, что хромосомы мужского пронуклеуса участвует в рааватжж /Черфас, 1969, 1979). Таким образом, процесс оплодотворения у двуполой формы серебряного карася сходен с таковым у других бнсексуалышх жждов .

В цитоплазме яйца однополой формы серебряного карася го­ ловка спермин не претерпевает никажжх — т в световом д микроскопе изменений; мужской пронуыеус не образуется ж от­ цовские хромосомы в развитии не участвует. Но проникновение спермия в яйцо является необходимым для инициации зародыше­ вого развития: искусственно активированные яйца образуют перивителлнновое пространство и бластодиск, но неспособны дро­ биться. Можно думать, что основная роль спермня у гнногенетжческой формы серебряного карася заключается во внесении в яйцо центрнолей /Головинская, 1954; Черфес, 1969, 1979; Lie­ der, 1955, 1959/. Цвнтрмола в зрелых яйцах костистых рыб ототсутствувт /см. Гинзбург, 1968/; дробление оплодотворенного яйца осуществляется при участии центрмолей, внесенных спермнем /Iwamateu, Ohta, 1974; Oht*, Iwamateu, 1980, 1981/ .

По всей вероятности, исключение из развития отцовских хромосом происходит на ранней стадии формирования пронуклеу­ са я достигается изоляцией ядра спериия мембранными структу­ рами, препятствующими воздействию факторов, вызываниях де­ зинтеграция ядерной оболочки спермня и его превращение в мужской пронуклеус. Такая изоляция может быть достигнута двумя способами .

I .

Проникновение спермня в яйцо является результатом фа­ гоцитоза. В таком случае отцовский хроматин окружен, кроме ядерной оболочки и плазматической мембраны спермня, еще и плазматической мембраной яйца. Такая "защита" должна быть высокоэффективной, т.к. фактор, вызывающий дезинтеграцию оболочке сперматяческого ядра, не действует на плазматиче­ скую мембрану спермня и яйца /см. Детлаф, 1977/. Однако,если допустить, что спермяй проникает в яйцо путем фагоцитоза, то непонятно, каким образом выходят из ф&госомы центрноли .

Опираясь на литературные данные (см. ниже), можно предполокнть, что у серебряного карася часть сцерммев, проникаю­ щих в яйцеклетку, лишенную zona radiata, проникает путем фагоцитоза, но ети спермин впоследствии разрушаются я, повидимому, выделяются из яйца .

Опиты на млекопитающих показали, что при инкубации фнбробластов с суспензией некапацитярованных спермиев спермин входят в них путем фагоцитоза и впоследствии дегенерируют /Thillipe et ai., 1976; Keel et ai., 1981/. Около 80% спермиев человека, проникающих в фибробласты мышц в присутствии вируса Сендай, входят путем фагоцитоза (остальные 20^ - пу­ тем слияния мембран). Спермий окружается многочисленными микроворсинками яйца, заключается в фагосому к погружается в цитоплазму. Затем происходит лизис частей спермня; по окончании этого процесса в цитоплазме яйца обнаруживаются многочисленные цитоплазматяческие вакуоли небольших разме­ ров, содержащие фрагменты мембран, ядра и хвоста спермня /Meel et ai., 1981/ .

На яйцах мышей показано также, что в полиспермных яйцах сверхчисленные спермин заключаются в вакуоли и в этих вакуо­ лях выделяются из яйца. При этом спермин, по-видимощу, не разрушаются /Tu, Wolf, 1981/ .

J куршцн некоторые спермин входят в яйцо путем фагоцито­ за; их далыюЯиая судьба не научена /Окашига, Nlehiyaea, 1978/. Оплодрееоремне у птиц фшвнологнческн полнспержое /см. Гинзбург, 1968/ .

Во всех приведенных случаях (включая наши опыты) мы име­ ем дело с полиспермия« яйцами. Можно предположить, что ко­ гда спермин проникают в яйцо вне определенной области по­ верхности яйца (у костистых рыб - вне области под микропи­ ле) то это происходит путем фагоцитоза. В яйцах двуполой, формы серебряного карася вакуоли с дегенерирующими головками спермиев нами не были обнаружены, но это может быть связано с неполнотой наших данных: в срок 4 мин после осеменения (именно в этот срок в яйцах однополой формы были обнаружены вакуоли, содержащие сперматнческие ядра) яйца двуполой формы в электронном микроскопе не были изучены .

2. Спермий проникает в яйцо, так же как и у других жи­ вотных, путем слияния его плазматической мембраны с плазма­ тической мембраной яйца, и затем уже в цитоплазме окружается мембранными структурами .

Происхождение и природа мембранных структур, окружающих головку спермия в цитоплазме яйца однополой формы серебряно­ го карася, неясны. Не исключено, что это не настоящие мемб­ раны, а миелиноподобные структуры, образующиеся в результате распадения липопротеидов митохондрий /Sjstrand et ai., 1964/. Дезинтеграция митохондрий вблизи от головки спермия была нами действительно обнаружена .

Чтобы понять механизм исключения из развития отцовского ядерного материала у однополой формы серебряного карася, не­ обходимы дополнительные электронно-микроскопические исследо­ вания (в первую очередь, выяснение механизма проникновения спермия в яйцо) .

Литература

Гинзбург A.C. Оплодотворение у рыб и проблема полиспермии. М.: Наука, 1968, - 358 с .

Головинская К.А. Размножение и наследственность у серебряно­ го карася. - Труды ВНИИЛРХ. М., 1954, т. 7, с. 34-57 .

Детлаф Т.А. Становление организации зрелого яйца у амфибий и рыб на заключительных стадиях оогенеза, в период созре­ вания. - В кн.: Современные проблемы оогенеза. М.: Нау­ ка, 1977, с. 99-144 .

Саат Т.В. Закономерности созревания ооцитов у костистых рыб (на примере вына и серебряного карася): Автореф. дис .

... канд. биол. наур. - И.: Изд-во ин-та биологии разви­ тия, 1983. - 21 с .

Черфас Н.Б. Анализ мейоза у однополых и двуполых форы сереб­ ряного карася. - Труды ВНИИПРХ, М., 1966, т. 14, с. 63Черфас Н.Б. Основные итоги цитогенетического анализа однопо­ лой и двуполой формы серебряного карася. - В кн.: Гене­ тика, селекция и гибридизация рыб. М.: Наука, 1969, с. 85—98 .

Черфас Н.Б. Гиногенез у рыб. - В кн.: Кирпичников B.C. Гене­ тические основы селекции рыб. М.: Наука, 1979, с. 245Brummett A.R.. Dumont J.W. Initial stages of sperm penetra­ tion into the egg of Pundulus heteroclitus. - J. Exp .

Zool., 1979, v. 210, H 3, p. 417-434 .

Iwaaatau Т.. Ohta T. Cleavage initiating actiyitles of sperm fractions injected into the egg of the medak», Oryziaв latipes. - J. Exp. Zool., 1974, v. 187, N 1, p. 3-12 .

Iwaaatsu T.. Ohta T. Electron microscopic observation of sperm penetration and pronuclear formation'in the fish egg. J. Exp. Zool., 1978, v. 205, N 2, p. 157-179 .

Iwamatsu T.. Ohta T. Scanning electron microscopic observa­ tions on sperm penetration in teleostean fish. - J. Exp .

Zool., 1981, v. 218, К 2, p. 261-277 .

Kobavaahl W., Yamamoto T.S. Pine structure of the micropylar apparatus of the chum salmon egg, with a discussion of the mechanism for blocking polyspermy. - J. Exp. Zool., 1981, v. 217, N 2, p. 265-275 .

Kudo S. Sperm penetration and the formation of a fertiliza­ tion cone in the common carp egg. - Develop., Growth and Differ., 1980, v. 22, N 3, p. 403-414 .

Kunkle M. Male pronucleus formation in the sea urchin,Strongylocentrotus purpuratus. - J. Cell Biol., 1979, v. 83, 12, p. 205a .

Kunkle M.. Longo F.J.. Magun B.B. Nuclear protein changes in the maternally and paternally derived chromatin at fer­ tilization. - J. Exp. Zool., 1978, v. 203, N 2, p. 317bieder. Mannchenmangel und naturliche Parthenogeneses bei Silberkarausche Carassius auratue gibelio (Vertebrata, Pisces). - Haturwiss., 1955, Bd. 42, H. 21, S. 590-594 .

Lieder U. ber die Bientwicklung bei tinohenlosen Stamsen bei Silberkarausche Carassius auratue gibelio (Bloch)(Verteb­ rate, Pisces). - Biol. Zbl.v, 1959, Bd. 78, H. 2, 3. 284Longo У.J. Fertilization. A comparative ultrastraotural re­ view. - Biol. Beprod., 1973, v. 9, H 2, p. 149-215* Longo P.J. Derivation of membrane comprising the male pro— nuclear envelope in inseminated sea urchin egg.- Deve­ lop. Biol., 1976, v. 49, p. 347-368 .

Longo P.J.. Anderson B. The fine structure of pronuclear de­ velopment and fusion in the sea urchin, Arbaoia punotulata. - J. Cell. Biol., 1968, v. 39, N 2, p. 339-36»

Longo P.J. Kunkle M. Transformations of sperm nuclei upon In­ semination. - In: Current Topics.in Developmental Bio­ logy, v. 12. Fertilisation /Ed. A.A. Moaoona and A.Honrcy. - N.Y. - London, Academio Prese, 1978, p. 149-184 .

Meel F,C.M..Beverstock G.C.. Pearson P.L.. Daema W.T. Elec­ tron microscopic studies on the incorporation of human spermatozoa into mouse fibroblasts following Sendai vi­ rus fusion. - J. Ultraetr. Res., 1981, v. 75, N 2, p .

142-150 .

Ohta T.. Iwamatsu T. Initiation of cleavage in Oryelae latipes eggs injected with ceatriolee from sea urchin spermatozoa. - J. Exp. Zool., 1980, v. 214, H 1, p.93Ohta T. Iwamatsu T. Morphological observations on cleavage of the egg of the medaka, Oryzias latipes, following In­ jection with flagellar microtubules of sea urchin sper­ matozoa. - J. Erp. Zool., 1981, v. 218, H 2, p. 293 Okamura P.. Nishivamy H. Penetration of spermatozoon into the ovum and transformation of the sperm nucleus into the male pronucleus in the domestic fowl, Gallus gallus. Cell Tiss. Res., 1978, v. 190, p. 89-98 .

Phillips 5.G.. Phillips D.M.. Dev V.G.. Miller P.A.. Mil­ ler O.J. Spontaneous cell hybridization of somatic cells present in the sperm suspensions. - Exp. Cell Res.,19%, v. 98, p. 429-443 .

Poccia D.. Salik J.. Kryetal G. Transitions of histone va­ riants of the male pronucleus following fertilization and evidence for a maternal store of cleavage-etage htetones in the sea urchin egg. - Develop. Biol., 1981,v .

82, N 2, p. 287-296 .

Sdstrand P. S..Anderson C.E.Karlsson U. Myelin-like figures formed from mitochondrial material.-Nature,1964,v.2o2,N 4937, _ 1075-1o78 .

P' Yu S.-F.,Wolf D.P. Polyspermie mouse eggs can dispose of su­ pernumerary sperm.-Develop. Biol., 1981,v. 82,N 2гр.2оЗ-21о .

BLBCTRON MICROSCOPIC OBSERVATION OH FERTILIZATION IN THE

BISEXUAL AND UNISEXUAL FORMS OF CARASSIUS AURATUS GIBELIO

E.Jurenen, T.Saat Summary In the bisexual form,the process of fertilization re­ sembles that of other animals Investigated so far. Fusion of sperm and egg plasma membranes results in the incorporation of eperm nucleus Into the egg cytoplasm.At 15 set and 1 mln postlnsemlnatlon (22-23°C) the sperm nuclear envelope vesfcullzatlon and deslntegratlon occurred.Up to 8 mln postinaeminatlon.the electron density of sperm chromatin continuously decreased.At 12 mln,young male pronuclei were detected;

formation of the pronuolear envelope was in progress.At 24 min,the fully formed male pronuclei were detected .

In the unisexual form, the sperm fate was entirely dif­ ferent of that described above. At 32 mln postlnsemlnatlon, unchanged sperm nucleus (with the intact nuclear envelope ) was found in the egg cytoplasm.The sperm nucleus and its miteehobdrla were packed into several layers ofi membraneous structures;the origin of these structures remains unknown .

ВРЕМЕННЫЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ПРОЦЕССА ОПЛОДОТВОРЕНИЯ

У КАРПА И СЕРЕБРЯНОГО КАРАСЯ

–  –  –

Процесс оплодотворения у костистых рыб уже давно привле­ кал внимание исследователей и его морфология на светооптическом уровне достаточно хорошо изучена /Гинзбург, 1968/. В то же время данные о хронологии этого процесса отрывочны и ма­ ло сопоставимы между собой. Вменение временных закономерно­ стей процесса оплодотворения, (сроков завершения мейоза в яйце, времени формирования и миграции пронуклеусов * др.) у рыб - объектов разведения представляет не только теоретиче­ ский, но и практический интерес. Получение таких данных от­ крывает путь для различных экспериментальных воздействий на яйца на строго определенных стадиях процесса оплодотворения .

Такая возможность может быть успешно использована в работах по управлению генетическими особенностями рыб - объектов се­ лекции /Васецкий, 1977; Черфас, Цой, 1984/ .

Широкие перспективы для сравнительного изучения хроноло­ гии оплодотворения у пойкилотермнык животных открывает вве­ денный Т.А. Детлаф метод относительной (безразмерной) харак­ теристики продолжит ельно сти развития. Единицей измерения при етом служит продолжительность одного митотического цикла в период синхронных делений дробления -Со»Такая единица вклю­ чает в ебя одноаременно как видовую специфику скорости раз­ вития, так и зависимость этой скорости от температуры /Дет­ лаф, Детлаф, I960, 1982/. Этот метод использован и в настоя­ щем исследовании .

Материал и методика

В опытах использовали созревшие после гипофизарной инъ­ екции яйЦа 2 самок карпа Cyprinus carpiо L. и одной самки двуполой формы серебряного карася Caraasiua auratua gibelio (Bloch) .

Зародыши развивались в чашках Петри при постоянной тем­ пературе (16,5+0,1° я 17,5+0,1° у карпа и 19,0+0,1° у се­ ребряного карася). Величина to прж указанных температурах составляет 49 ж 41,5 мин у карпа /Игнатьева, 1979/ ж 30 мжн у серебряного карася /Саат, 1983/ .

Зародыш фиксировали жидкостью Санфеличе (серебряный ка­ рась) или Буэна (карп), начиная с 0,6 Тс после осеменения с интервалом в 0,1-0,2 Те (табл. I) и заливали в парафин. Се­ рийные срезы толщиной 7 или 10 мкм окрашивали железным гема­ токсилином по Гейденгайну или азокармином по Гейденгайну /Ромейс, 1953/. Измерения на срезах проводили с помощью оку­ ляр-микрометра M0B-I (прж увеличении 15x40) .

На серийных срезах изучали 411 яиц .

Таблица I Распределение яжц карда и двуполой формы серебряного карася по стадиям оплодотворения на разных сроках фиксации

–  –  –

0,6 23 23 3 -

–  –  –

1,4

-

–  –  –

Изученный наш период (0,6-2,0 С, после осеменения у карпа и 0,6-1,8 t„ - у серебряного карася) можно разделить на 4 стадии: I) миграция пронуклеусов, 2) контакт процуклеусов, 3) дезинтеграция оболочки пронуклеусов и метафаза I деления дробления и 4) анафаза I деления дробления и форми­ рование борозда дробления (табл. I) .

На сроке 0,6 t0 после осеменения в яйцах карпа и сереб­ ряного карася уже имелись как мужские, так и женские прону­ клеусы (табл. I). Мужской процуклеус в яйцах серебряного ка­ рася формируется около 0,4 Со после осеменения /Юронен, Са­ ат,1985/, т.е. примерно в то же время, что и у вьюна и белу­ ги (табл. 2) .

В яйцах изученных видов костистых рыб пронуклеусы встре­ чаются спустя ~ 1 Со после осеменения, дезинтеграция оболоч­ ки пронуклеусов имеет место спустя 1,5-1,6 То после осеме­ нения; метафаза первого деления дробления была обнаружена в интервале 1,6-2,0 Со после осеменения (табл. 2). Результа­ ты, полученные по другим показателям у изученных видов кос­ тистых рыб, также хорошо совпадают (табл. 2). Не исключе­ но, что между костистыми и осетровыми рыбами в хронологии процесса оплодотворения имеются некоторые различия (табл. 2, см. сроки декоцценсацки хроматина спермня, появления семен­ ной звезды и дезинтеграции ядерной оболочки пронуклеусов) .

Размеры пронуклеусов. У карта на сроке 0,6 Со после осе­ менения мужской пронуклеус был крупнее женского (7,6 + 1,0 х х 5,2 ± 0,7 и 4,3 + 0,8 х 2,6 + 0,6 мкм, соответственно). В дальнейшем размеры пронуклеусов постоянно увеличивались, причем у женского пронуклеуса быстрее чем у мужского; в ре­ зультате этого начиная со срока 1,0 Т0 после осеменения жен­ ский пронуклеус стал крупнее цужского (рис. I, А, Б). Парал­ лельно с ростом изменялась форма пронуклеусов: у карпа они становились более удлиненными. На сроке 0,6 после осеме­ нил соотношение большего и меньшего диаметров составляло для мужского пронуклеуса 1,6 и для женского пронуклеуса 1,5, на дроке 1,6 Г0 - 2,0 и 2,4 соответственно (см. рис. I) .

У серебряного карася, в отличие от карпа, приросты боль­ шего и меньшего диаметров пронуклеусов существенно не разли­ чались (рис. I, В, Г); в результате у »того вида пронуклеусы Таблица 2 Хронология оплодотворения (в числе Со ) у рыб*

–  –  –

?

О

–  –  –

* Литературные данные пересчитаны нами в числе Т0 ; величины Со для этих видов см. Игумнова, 1975; Костомарова, 1975; Игнатьева, 1979; Саат, 1983 .

По Сронен, Саат6 1985; пересчитано нами в числе Са • И Рже. I. Размере пронуклеусов (мае) в яйцах карпа (А - мужской, Б - женскж* пронуклеус) ж серебряного карася (В - щужской, Г - женскжй пронуклеус) в разные срок* после осе­ менения (Со). I - длинный ж 2 - короткий диаметр пронуклеусов .

становмясь в процессе роста более округлым*. Однако выяв­ ленные различия могут быть обусловлены * разным* способам!

фиксации яжц у втих видов /Гжнабург, 1959/ .

Догружение пронуклеусов. У карпа ж серебряного карася (рже. 2), так *е как у белуг* /Гинзбург, 1959/, «енскжй про­ нуклеус все время располагался ближе к плазматической мемб­ ране яйца, чем мужской .

Скорость погружения пронуклеусов была рассчитана на ос­ нове данных о среднем расстоянии между пронуклеусам* * плаз­ матической мембраной яйца на разных сроках фиксации .

Скорость погружения пронуклеусов была максимальной в на­ чале исследованного нами периода (в интервале 0,6-0,8 Та, рис.2). У карпа скорость погружения в этом интервале состав­ ляла для женского пронуклеуса 104 мкм/Со, для мужского -78 м*м/ С„. Погружение пронуклеусов продолжалось и после встре­ чи пронуклеусов, со средней скоростью около 25 мкм/ (см .

рис. 2) .

В яйцах белуги скорость миграции пронуклеусов была су­ щественно больше, чем у карпа и составляла около 400-500 ккм/Со ; скорость погружения женского пронуклеуса ж у »того вида несколько больше, чем у мужского /Гинзбург, 1959, пере­ считано нами в числе Со). У белуги скорость погружения про­ нуклеусов в цитоплазму затухает лишь сцустя некоторое время (спустя окого 0,2 Со) после встречи пронуклеусов /Гинзбург, 1959/ .

Завершившие погружение пронуклеусы располагаются у белу­ ги в 300-350 мкм от поверхности яйца /Гинзбург, 1959/, у карпа - в -v. 70 мкм и у серебряного карася - в 40 мкм от поверхности яйца. В яйцах белуги затухание скорости погруже­ ния пронуклеусов наступает позднее (~ 1,2 С0 после осемене­ ния, Гинзбург, 1959), чем у исследованных нами костистых рыб (около I С0 у карпа я менее IС„у серебряного карася, рис. 2) .

Таким образом, в яйцах белуги путь миграции пронуклеусов значительно длиннее, чем у карпа и серебряного карася. Эти различия связаны с разным характером дробления у костистых и осетровых рыб. Если бы скорость миграции пронуклеусов в яйцах белуги была такой же, tiro у карпа, одно *х погружение продолжалось бы около 3-4 Со. На самом деле относительная продолжительность периода от осеменения до появления борозды первого деления дробления в яйцах осетровых рыб (2,6 Г0 у белуги /Игумнова, 1975/; 3€су осетра и севрюг* - /Детлаф, Рис. 2. Расстояние (шш) между поверхностью яйца ж пронухлеусамж (I - щужской, 2 - женский) ж твяду щужсхжм ж женсжжм пронуклеусо* (3) у карпа в разные сроки (Со) после осеменения .

1953/ лижъ ненамного больае, чей у рамах видов костистых рыб /2,0-2,3 Т0 /Игнатьева, 1979/. По-видимону. в срока дезинтеграции оболочке пронуклеусов • появления метафезы первого деления дробленая в яйцах костистых в осетровых рыб сильно не различаются (см. табл. 2). Думается, что его до­ стигается двумя способами - более высокой скоростью миграции и большей продолжительностью периода быстрой миграции прону­ клеусов в яйцах осетровых рыб. Аналогичная (основанная на разной скорости миграции пронуклеусов) регуляция срока за­ вершения процесса оплодотворения может иметь место и в яйцах разного размера. Использованные в наших опытах яйца карпа были больше яиц серебряного карася (диаметр на срезах около I и 0,8 мм соответственно). Пронуклеусы карпа нитрировались в большую глубину» чем у карася (см. рис. 2), но переход к первому делению дробления осуществлялся в одни и те же сроки после осеменения (табл. 2) .

Литература

Беляева В.Н., Черфас Н.Б. 0 процессах созревания в оплодо­ творения в яйцеклетках вьюна (Mieguraue fossiils L.) Вопр. ихтиол., 1965, т. 5, I, с. 82-90 .

Васецкий С.Г. Мейотические деления. - В кн.: Современные проблемы оогенеза. М.: Наука, 1977, с. 145-172 .

Гинзбург A.C. Оплодотворение у осетровых рыб: I. Соединение гаыет. - Цитология, 1959, т. I, » 5, с. 510-526 .

Гинзбург A.C. Оплодотворение у рыб и проблема полиспермии. М.: Наука, 1968. - 358 с .

Дабагян Н.В., Слепцова Л.А., Балданова Д.Р., Газарян К.Г .

Оплодотворение и раннее дробление яйцеклеток вьюна (Misgurnus fossiile ь.).- Ж. общ. биол., 1981, т. 42, » 3, с. 440-447 .

Детлаф Т.А. Зависимость темпа дробления осетровых рыб от температуры. - Докл. АН СССР, 1953, т. 91, » 3, с. 695Детлаф Т.А., Детлаф A.A. О безразмерных характеристиках про­ должительности развития в ембрнолегии. - Докл. АН СССР, I960, т. 134, » I, с. 199-202 .

Детлаф Т.А., Детлаф A.A. Безразмерный крктермй как метод ко­ личественной характеристики развития животных.

- В кн.:

Математическая биология развития. М.: Наука, 1962, с.20ад Игнатьева Г.М.

Ранней эмбриогенез рыб ж амфибий (Сравнитель­ ный анализ временных закономерностей развития) - М.:

Наука, 1979. - 175 с .

Игумнова Л.В. Временные закономерности эародшевого развития белуге. - Онтогенез, 1У75, т. 6, * I, с. 47-54 .

Костомарова A.A. Вьш Misgurnus fossilis L. - В га.: Объекты беологев развжтея. М.: Наука, 1975, с. 308-323 .

Ромейс Б. Микроскопическая техника. - М.: ИЛ, 1953. - 719 с .

Саат Т.В. Закономерности созреванжя ооцжтов у костистых рыб (на пржмере вьюна ж серебряного карася): Дкс.... канд .

бжол. наук. - М.: Ин-т бжолог** развития, 1983. - 248 с .

Черфас Н.Б., Цой P.M. Новые генетические методы селекции рыб. - М.: Легкая в пещевая промышленность, 1984. с .

Сронен Э.И., Саат Т.В. Электронно-микроскопическое исследо­ вание оплодотворения у двуполой и однополой формы сереб­ ряного карася. В настоящем сборнике .

THE CHRONOLOGY OF FERTILIZATION IH THE CARP AED GOLDFISH

A.Aiateel Зщшагу The paper deals with teSpora1 aspects of the fertili­ zation In Cyprinus carplo and the diploid (bisexual) form of Caraeelue auratue glbello .

The chronology of the fertilization in these two species appeared to be similar: at 0,6 to post insemination the eggs contained both (male and female) pronuclei already, at OГо the pronuclei became into contact, at 1,6rothe pronuclear envelopes broke down and the chromosomes formed the metaphase plate of the first cleavage division, at 1,8jo the anaphase of the first cleavage appeared and the formation of the cleavage furrow was in progress .

Data on the growth dynamics and migration pattern of the pronuclei are presented .

ТАБЛИЦЫ ЭМБРИОНАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ ДШДОИДЮЙ

И ТРИПДОИДНОЙ ФОРМ СЕРЕБРЯНОГО КАРАСЯ

–  –  –

Серебряный карась Carassiua auratus gibelio (Bloch) представлен двумя формами - джплокдно* ж тркплокдной, pasмножащейся путем естественного патогенеза /Черфас, 1979/ .

Сравнительное жсследованже предзародшевого ж зародшевого развития этих форм представляет больеой интерес /5аат, 1983/ .

В частности, временная характеристика эмбрионального разви­ тия двух форм серебряного карася, различающихся по плоидности, может дать интересные данные о влиянии плойдности на эмбриогенез /Детлаф, 1965/, В настоящей работе приведены таблицы нормального эмбрио­ нального развития двух форм серебряного карася. Время на­ ступления стадий развития выражено в единицах относительной характеристики продолжительности развития - в числе Со. Ис­ пользование относительной характеристик* продолжительности развития дает безразмерные критерии продолжительности разви­ тия, сопоставимые у разных животных и пре разных температу­ рах /Детлаф, Детлаф, I960, 1982/ .

Методика

Опыты проводились в июне 1984 г. во Всесовзном научноисследовательском институте прудового рыбного хозяйства (Московская обл.). Использовалась икра двух самок диплоидной и двух - триплоидной формы серебряного карася, которую осе­ меняли спермой серебряного карася .

Зародыши развивались в аппаратах Вейса; температуру воды в них измеряли через каадые 10-20 мин. Опыты с двумя формами проводили одновременно; зародыши развивались в совершенно сходных температурных условиях. В течение опыта температура воды практически не изменялась (22,2+0,1 °С), а начиная с 145 С0 после осеменения постепенно снижалась до 18,4 °С .

Отсчет времени вели в числе Со от момента осеменения .

Величины Zo при разных температурах у двух форм серебряного / карася определены Г.М.Игнатьевой • Т.В. Самом /Саат, 1983/ .

Продолжительность периода развит«я (в числе Ср) постоянно корригировали в соответствии с изменениями температуры воды .

Зародыней просматривали в живом состоянии и фиксировали от момента осеменения до вылупления спустя каждые 2,0 .

Для фиксации зародышей использовали 4%-ый раствор формальде­ гида. Зародышей зарисовывали на последовательных стадиях развития при помощи рисовального аппарата PA-I под биноку­ лярной лупой в фиксированном состоянии .

Результаты и обсуждение

В процессе эмбрионального развития у обеих форм сереб­ ряного карася нами было выделено 40 стадий развития. По мор­ фологии развитие у двух форм не различалось, поэтому описа­ ние стадий приведено в одной таблице, а рисунки последова­ тельных стадий развития ДАНЫ лишь для диплоидной формы (таб­ лица, рисунок) .

Таблица Стадии зародьиевого развития диплоидной к триплоидной форм серебряного карася при температуре 22 °С

–  –  –

Рже. Стадия нормального эмбрионального развития диплоидной формы серебряного карася .

Номера под рисунками соответствуют номерам стадий .

Рнс. Стада* нормального эмбрионального развития дипловд»! форе серебряного карася .

Номера вод рисунка** соответствуют номерам стада! .

Рис. Стадии нормального эмбрионального развития диплоидно* форма серебряного карася .

Номера под рмсуккамж соответствует номерам стадий .

t**e. Стаде* нормального ембр*оналъ*ого раав*т*я денлоедно! формы серебряного карася .

Номер» под ршсункам* соответствуя* номера* стад** .

Рис. Стадии нормального эмбрионального развития диплоидной формы серебряного карася .

Номера под рисунками соответствует номерам стадий .

Время наступления одноименных стадий развития у двух форм серебряного карася такие существенно не различалось (таблица). Первые 5 стадий развития (до стадиг морулы) у двух форм наблюдались в одно и то же время. Последующие ста­ дии (бластуляция, гаструляция, появление первых пар туловищ­ ных сомитов и др.) вплоть до начала обособления хвоста от желтка (стадия 25, спустя 70 to после осеменения) у трипловдформы наступали на 2-4 Ъ0 раньше, чем у диплоидной .

Возможно, это связано с более ранним наступлением гаструля­ ция у трипловдной формы. Наступление гаструляции у трнплоидов на более ранней стадии (при меньшем числе клеток), чем у дхплоидов не доказано, но вполне вероятно /Детлаф, 1965/ .

Для получения ответа на этот вопрос необходимо специальное исследование, при котором серебряный карась может служить подходящим объектом .

Время наступления последующи* стадий развития (1 25~-39) у двух форм различалось до 2 to (таблица). Вылупление нача­ лось у тржплошдной формы на 6 с0 раньше, чем у диплоидно!' (соответственно 170 ж 176 после осеменения) .

Пермодизацкг эмбрионального развития триплоидной форei серебряного карася приведена в работе Пеняя ж соавторов /Репбл et ai., 1979/, там же имеются некоторые данные о вре­ мен* наступления и продолжительности некоторых интервалов ембриогенеза серебряного карася. Мы перевели эти данные о хронологии эмбриогенеза в число ?. Время наступления неко­ торых стадий развития практически совпадает с нашими данны­ ми, а но некоторш другим стадиям имеется существенные раз­ личия /savoiainen, 1985/. Следует отметить, что температура воды во время ошвов Пеняв и соавторов колебалась /Feniz et ai., 1979/. Что же касается морфологии эмбриогенеза, то наши данные хорошо согласуются с данными, приведенные в указан­ ной работе .

Литература

Детлаф Т.А. Продолжительность ннгеркннетических состояний метой, клеточные деления и дифференцировка.

- В кн.:

Клеточная дифференцировка ж индукционные механизмы. И.:

Наука, 1965, с. 147-159 .

Детлаф Т.А., Детлаф A.A. 0 безразмерных характеристиках про­ должительности развития в эмбриологии. - Докл. АН СССР, I960, т. 134, » I, с. 199-202 .

Детлаф Т.А., Двтлеф i.A. Безразыврвне кртаряж как метод коочественной харажтерЕСТжхж развития животных. - В кн.:

Матенатжческая бжологжя развития. М.: Наука, 1962, с.25Саат Т.В. Закономерностж созревания ооцжтов у жостнстнх рыб (на прамере вьяна ш серебреного карася): Д»с.... канд .

бнол. наук. - *.: Ин-т бжологж* развжтня, 1963. - 248 с .

Черфас Н.Б. Гжногевеа у рыб. - В кн.: B.C. Кжрпжчкмкоя. Ге­ нетические основы сележцжи рыб. *.: Наука, 1979, с. 245Рейая П., ВаЪ Р. РгокеХ Ж. Cytologloal analystв, gynogeneeis and. early development of Caraeeius auratue glhello.- Ao­ ta So. Hat. Brno, 1979, vol. 13, H 7, p. 1-33 .

Savolainen M. Hobekogre diploid»« ja trlploldee TOCTEI ning karp­ kala embronaalne areng# - TartusTED,1985.Diplomit B zooloogia kateedri». - 63 lk .

STAGES OP EMBRYONIC DEVELOPMENT IN BISEXUAL A*D

UNISEXUAL POEMS OP CARASSIUS AURATUS GIBELIО

Ж. Savolainen Summary The morphological pattern of the embryonic development in the two forma of Carasalu» auratua glbello appeared to be Identical; 40 stages of development were distinguished. In the unisexual form,the relative apeed of embryonic development (measured in number of To ; Zq - the duration of one mitotic cycle during the period of synchronous cleavage division») was aomewhat faster than in the bisexual form; the differen­ ces became evident from the beginning of gaatrulation .

ИЗМЕНЕНИЕ МАССЫ ГИПОФИЗА ЛЕЩА В ТЕЧЕНИЕ

^ПРОДУКТИВНОГО ЦШШ

–  –  –

В связи с теп, иго гипофиз является ведущей эндокринной железой, регулирующей процессы созревания и нереста рыб /Гербильсккй, 1947; Piekford, Atz, 1957/, изучение его функ­ циональной активности, выраиением которой является изменение его массы на разных этапах репродуктивного цикла, представ­ ляет больной интерес. Данная работа посвящена изучению изме­ нений массы гипофиза в течение репродуктивного цикла у леща

- важного объекта рыболовства во внутренних водоемах СССР .

Материал и методика

Материалом исследования служили лещи из озера Выртсъярв .

Всего было проанализировано 342 (60)* самки и 353 (39) самца леща. Материал собран в течение 3 лет (1978-1980). Все ис­ следованные ссобн подвергались полному биологическому анали­ зу по общепринят™ методикам /Цравдин, 1966; Брюзгни, 1969/ .

Гипофизы извлекали после открытия черепа при помощи инстру­ ментов зубного врача я обезвоживали в двух порциях чистого ацетона /Заготовка..., 1977/. Ацетонжрованные гипофизы взвемивали на аналитических весах "МЕОРТА" АЗ/200 с точностью до 0,1 мг. Корреляционный анализ проводили на ЭВМ "НАИРИ-2" кафедры лесного хозяйства и мелиорации ЭСХА .

Результаты и обсуждение

Данные анализа массы ацетонированных гипофизов (МАГ) од­ норазмерных неполовозрелых рыб показали, что значения сред­ не* массы железы исследованных рыб различаются по сезонам весьма незначительно. МАГ половозрелых лещей в течение поло­ вого цикла изменяется значительно. У половозрелых рыб с оди­ наков»« размерами или массой тела в разные сезоны МАГ самок * В скобках указано число проанализированных неполовозре­ лых особей .

достоверно превышает МАГ сащев. В преднерестовый первад сред*** МАГ у самок со средазй массой норки 390+30 г составджет 1,98*0,11 «г, а у самцов (средам масса норм 568*20 г) соответственно 1,51*0,06 мг .

Л""»»«""' средне* массы гипофизов половозрелых леще* с оданаково* массой норм на протянем полового дана пред­ ставлена на рнс. I. Крнше, хфажтернзуиирм» ммаяенм МАГ обоих полов, а также ганадосомитического индекса (ГСМ), имевт в основном одинаковы* характер. С развнтнем гонад по мере нажопленм в ооцнгах трофических мшим! средам масса гепофма заметно уиеличииаетея ж достигает максимальных »шат­ тл в преднереотовы* иерее*. (В пермод активного рмвкгая паевых желез змченм массе гипофиза достоверно больнже в сравнеим с мае со* гипофма мецнпгг ж отнерестменхся рнб) .

У текучих особе* ж у самок, einen мил порцию жкре, средам масса железы уменьшается по iре моим с таково* в конце IУ ж 1У-У стадам зрелости. ДппмМв» глииеииа МАГ отмечается у полжостье отнерестжмвся рнб. Дм самок, не созреввяцжх в дайны* сезон (пропусками* по каким-либо причинам мреет), характерны довольно мзме значения массы их гжгюфваа, не отличаяциеся от таковых нееоловозрелнх самок .

Данные о сезонной динамке массы гжпофюа у равных вкдов реб в ихтиологической литературе сравнительно малочисленные .

Изменение массы гипофма при активном фунхдаонироважм половых желез установлено у атлантическое треска /Woodhead, 1971/, у больного ИНДИЙСКОГО жадна Olxrhlma arigala /Holtга, sarkar, 1976/, у сайды /Оторофж, 1977/, а также у чер­ номорских кефале* /Куликова, Вальтер, 1962/ и камбаловых /Моисеева, 1972; Золотннцм*, Моисеева, 1976; Моисеева, Золотницкий, 1979/ .

С целью установления связей между МАГ и другим биологи­ ческим показателям у половозрелых лещей нам проведен кор­ реляционный аналкз, результаты которого представлены в таб­ лице. МАГ самок и самцов леща достоверно коррелируете^ с их длиной тела, массой норм, возраст«! и ГСП. Мевду МАГ и упи­ танностью рыб достоверные свям отсутствует, 'и»™ резуль­ татов проведенного нам корреляционного анализа с г-" g-преобразован« /Захс, 1976/ показал, что связи иевду МАГ леца и размерам тела, возрастай и ГСП у самок и еащов по­ ложительные, выявляется равносильно и достоверно при уровне зиачшости Р • 0,01. Ппюяыв различия отражаются линь в коеффмдаентах корреляции, хараитернзунцих семь МАГ с иесоо* §2,0 ^1,8 41.6

–  –  –

0,30 0,70 0,59 0,67 0,38 0,21 0,46 0,26 00* ++ МАГ 6? 0,44 0,48 0,51 0,41 0,23

–  –  –

С3 - упитанность по Кларк; ГСИ4 - гонадоооматичесжяй индекс; ИАП5 - индивидуальная абсолютная плодовитость; И0П® - индивидуальная относительная плодовитость .

порта рыб. У само* леща связь между МАГ и массой порта (г = = +0,67) выражается сильнее, чем у самцов (г = +0,51) .

Следовательно, масса гипофиза леща зависит от размеров массы и возраста рыб, и по мере роста их увеличивается и МхГ. Особи, у которых масса гипофиза больше, имеют и более крупные и развитые гонады. У самок и самцов как индивидуаль­ ная вариабельность МАГ, так и средние ее значения для особей с 'динаховой массой тела одного и того хе сезона (одной и той же стадии зрелости) в разные годы изменяются мало. Упи­ танность рыб не связана с функциональной активностью гипофи­ за. выражением которого является изменение его массы в тече­ ние репродуктивного цикла. Изучение данных корреляционного анализа, проведенного на самках, показало, что связи между МАГ и размерами тела (г = +0,59), массой порки (г = +0,67) и ГСИ (г = +0,46) равносильны и достоверны при уровне значимо­ сти Р 0,01. Относительно бо'лыпую вариацию массы гипофиза, наблюдаемую у одновозрастных особей по сравнению с вариацией МАГ у рыб с одинаковыми размерами или массой тела, можно объяснить слабее выражающейся связью между МАГ и возрастом (г «+0,38) .

Значительная положительная корреляция (г = +0,70), выяв­ ляющаяся между МАГ самок леща ж индивидуальной абсолютной плодовитостью (ИАП) на уровне значимости Р ^ 0,01, свиде­ тельствует о тесной связи сезонных изменений массы гипофиза с процессами развития ооцитов и становления плодовитости у производителей .

Связь массы гипофиза самок с размерами икринок выражает­ ся слабо (г = +0,30 при Р -• 0,05), а с массой икринок вообще отсутствует. Следовательно, размеры икринок и их масса зави­ сят не столько от массы гипофиза (от гонадотропной активно­ сти) сколько ст разнообразных факторов среды, определяющих, успеюость нагула и вместе с этим обеспеченность генератив­ ного обмена особей энергетическими и пластическими материа­ лами .

Анализ нашего материала в сезонном аспекте свидетельст­ вует о том, что на разных этапах полового цикла, т.е. в раз­ ные сезоны года коррелятивные связи между МАГ леща и длиной и массой тела, возрастом, а также ГСИ выявляются в разной степени. Тесная зависимость прослеживается у неполовозрелых ж отнерестившихся самок. Б течение активной фазы полового цикла, в период роста и развития половых клеток она выражена менее отчетливо, вероятно, вследствие вариабельности физио­ логического состояния созревающих особей. Абсолютная масса гипофиза у особей с одинаковой массой пори на разных стади­ ях зрелости заметно варьирует. По мере развития гонад вариа­ бельность постоянно усиливается, но в послеверестовый период пределы индивидуальных колебаний сужаются .

Аналогичная динамика вариабельности массы гипофиза у од­ норазмерных особей на разных фазах полового цикла прослежи­ валась и у черноморских кефалей /Куликова, Вальтер, 1982/ .

Поскольку масса гипофиза тесно коррелирует с состоянием го­ над, а также с гистологической картиной гонадотроиной зоны аденогипофиза (по мере увеличения количества и размеров гонадотропных клеток в ходе активной фазы репродуктивного цик­ ла - вителлогенеза увеличивается и масса гипофиза) /Ноорнтс, 1984/, то можно предположить, что ее изменения связаны с из­ менением гонадотропыой активности гипофиза. Это мнение под­ тверждается также данными, подученными при исследовании дру­ гих видов рыб. На примере индийского карпа Cirrhims mrigala показано /Moitra, Sarkar, 1976/, что нарастание массы гипофиза обусловлено увеличением количества гонадотропных клеток и их размеров. Установлено также, что у бычка-кругля­ ка и камбалы-калкана доля участия гонадотропных клеток в из­ менениях массы гипофиза гораздо вше, чем доля участия дру­ гих типов клеток /Моисеева, 1972; Моисеева, Золотницкий, 1979/ .

Подытоживая результаты нашего исследования, отмечаем, что масса гипофиза половозрелого леща в течение репродуктив­ ного цикла тесно коррелирует с состоянием гонад и поэтому изменения ее могут служить количественной характеристикой гонадотропной функции на определенных этапах развития гонад .

Литература

Брюзгин В.Л. Методы изучения роста рыб по чещуе, костям и отолитам. Киев, Г969. - 186 с .

Гербильский Н.Л. Гонадотропная функция гипофиза у костистых и осетровых. Тр. Лаб. основ рыбоводства. Л., 1947, т. I, с. 25-95 .

Заготовка и использование гипофизов серебряного карася для стимуляции созревания промысловоценных рыб: Методическое указание. Кишинев, 1977. - 12 с .

Закс Л. Статистическое оценивание. М., 1976. - 597 с .

Золотницкий А.Г., Можсеева К.Б. Исследование гонадотропно* функции гвюфива камбаю-калкана. - Тр. ВШРО, 1976, т. 115, с. 97-65 .

Куликова H.H., Вальтер Г.А. Изменение массы гипофиза в тече­ ние репродуктивного щпсла у черноморских кефалей (MugiUdae, Huglllfогяев/. - Зоол. журн., 1962, Т. 61, f 3, с. 377-384 .

Можсеева Е.Б. Изменения веса гжпофшза как показателя его функционального состояния на разных »гадах полового цик­ ла бычка-кругляка orbius меХаповtene Pall.- Вопр. их­ тиол. 1972, т. 12, вып. 5(76), с. 875-880 .

, Моисеева Е.Б., Золотницкий А.П. 0 возможности оценки гонадотропной функции гипофиза рнб по изменениям его массы в течение полового цикла (на примере Scophthalnis naeoticrua Pelleutl'.-Bwox.моря(Владивосток), 1979, 1 4, с. 47-52 .

Нооретс Т.К. Резонные изменения воспроизводительной системы леща: Автореф. две.... канд. бжол. наук. М., 1984. с .

Цравдин И.*. Руководство по изучению рыб (преимущественно пресноводных). М., 1966. - 376 с .

Сторощук А.ff. Иорфофиз «»логические и биохимические особенно­ сти созревания сайды (Pollасblue tirena I»)Северного моря .

- Тр. ВШРО, 1977, т. Ш с. 58-65 .

, Jtoltra S.K., Sarkap S.K. Seasonal variations in the histolo­ gy of the pituitary gland of Clrrhlnua eri gala (Hem.) on Indian freshwater major carp, In relation to gonadal ac­ tivity. - 2. KLkrosk.-anat. ftreeh», 1976, vol. 90, H 1, p. 154-174 .

Pickford G.E., Ats I.I. The physiology of the pituitary gland of fishes. Mew York, 1957. - 613 p .

Boodhead P.M.I. Relationship of pituitary else to body weight in eed, Gadns eorima. - Gen. Coep. Bndoprlnol., 1971,vol .

16, 11, p. 160-162 .

CHANGES 15 THE PITDITAEY WEIGHT OP

BREAM DORIHG REPRODUCTIVE CYCLE

T. Hrits Summary Seasonal dynamics of the pituitary weight (PW) of ma­ ture breams resemble, in general, dynamics of the GSI of fish .

Before spawning the average PW of females (with average body weight 590*30 g) forms 1,98*0,11 mg, and PW of males (with average body weight 568* 20 g) 1,51*0,06 mg accordingly. Du­ ring the whole seasonal cycle males pltuitarles weighed sig­ nificantly less them those of females. PW correlates signi­ ficantly (P0,01) with lenght (r - +0,59), weight (г»+0^б9Х age (r= + 0,38) and fecundity (r- + 0,70) of fish .

СЕЗОННАЯ ДИНАШКА ЛИПИДОВ И ГЛИКОГЕНА В

ГОНАДАХ ЛЩА (НА ПРИМЕРЕ ВЫРТСЪЯРВСКОГО ЛИЦА)

–  –  –

Несмотря на интенсивное изучение рол* лжпидов как основ­ ного енергетического субстрата обменных процессов рыб (Наnahan, I960; Пульман, 1972) я гликогена, число работ по семюм! диьамике содержания вшеназванных энергетических ве­ ществ у рнб яевелнко. Кроне того, болыошство утях исследо­ ваний характеризуя* изменения в содержа*** лмгшдов * глико­ гена в печени я мницат рнб э течение нагула: гораздо неяьие исследован**, в которых сезонную динамику рассматриваю в комплексе с. процессам» генеративного обмена /Яаугасте я др., 1972; Матучовскн* я др,, I972v 1975; Мильман и др., 1977;

Вмуновсккй 9 1980/. Вопроса содержали* в динаммк* энергети­ ческих веществ в гонадах пресногодных костистых (в тон числе и карповых) является малоизученными .

Цель» дайной работа служит выявление динамике лнпидов я гликогена в гонадах леща с использован*#* методов гистохяатереал я методика Материал для изучения сезонной дннамякя дяпндов я глико­ гена а гонадах ле^д собран в I976-1981 гг. из озера Выргсъ­ ярв,. Всего было проанализировано 1228 экз. рыб. Сборы и об­ работку материала проводили по общепринятый методам /Роским, Лемнеон, 1997; Пирс, 1962; Правд**, 1966/. Лнпяды окраинва­ ля растворам* Судана черного Б как в пропилеигликоле, гак я в 70%-ном спирте. Гликоген выявил* реакцией EHK. Для оценки относительного содержаяжл резервных веществ (гликоген, аивядн) в геиадах использовали метод та* называемой "стуиеичатой оцежкн", который применен ряден исследователей Alireh, Pelt, 1937; Шаоадаи, 1939, 1949; Лаугаста и др., 1972, 1974/ юфш изучении обмена гликегена и липидов жак в печени, так и в меримой системе мяекевжгаищмх я рыб. Из больмого количест­ ва препаратов выбирает равлнчаищнеся друг от друга по ступе­ ням в отноменнк интересующего нас признака. Джя оценки колнпаства гликогена * липидов в гонадах наш использована четмрехбажльная шкала »талонов (pec. 1, 2). Стад« зрелости го­ над •фазы развития ооцитов определял* по общепринятой шкале /Сакун, Буцкая, 1968/ .

Результаты • обсуждение

Как жзвестно /Данкленко, 1967, 1972; Boulekbache,i98i/, в биодинамике клеток лкпиды * гликоген играют роль энерге­ тических резервов. OHE выявляется в семенниках, а также в яичниках (половых клетках - п.к.) производителе* леща в веде мелких зерншек и капелек (рже. 3-6). Гликогену и лнпкдам свойственна своеобразная сезонная динамика, которая в боль­ шей или меньшей степени совпадает.с динамикой ГСМ половозре­ лых лещей (рже. 7) .

В развевающихся ооцжтах липкды обнаруживаются уже во II стада* зрелости - в июле в ооцктах обнаруживается узкая околоядерная суданофшльная зона, которая в дальнейшем постепен­ но расширяется. Резко увеличивается содержание липвдов с ав­ густа то сентябрь (III стадия зрелости). С ноября по нере­ стовый першод (май) заметных изменений в содержании липидов в ооцктах не наблццается .

Гликоген появляется в развивающихся ооцктах в начале марта (вторая половина 1У стадо зрелости) и в дальнейшем интенсивно накапливается, достигая максимума своего содеркания (~ 2,7 балла по визуальной шкале) к нерестовому пе­ риоду. В остальные сезоны года гликоген в ооцктах не обнару­ живается .

Накапливание липидов и гликогена в семенниках леща начи­ нается обычно с июля (рнс. 7). Если содержание липвдов в семенниках сначала повшается резко, достигая уже к началу августа 2-2,b балла по визуальной шкале, и в последующие ме­ сяцы изменяется незначительно, то гликоген накапливается постепенно и медленно, достигая максимального своего содер­ жания ( ~2 балла) лишь в ноябре. В дальнейшем со­ держания липвдов и гликогена в семенниках получает сходство, начиная с зимних месяцев (январь, февраль) начинается их постепенное расходование на цувды продолжающегося генератив­ ного обмена, следовательно, снижаются и кривые, характери­ зующие их динамику. Содержание липидов и гликогена умень­ шается постепенно и в нерестовый период составляет щиар«« 0,6-0,7 балла (липиды) - 0,2-0,3 балла (гликоген). В посленерестовый период гликоген в семенниках не обнаруживается .

Лтидц не обнаруживаются линь в течение короткого периода в конце июня .

Вопросы содержания и динамики энергетических резервов в гонадах рыб методами гистохимии сравнительно мажоизучены .

Установлены локализация и динамика гликогена в ооцитах карп& и плотвы /Даниленхо, 1967, 1972/. В некоторых аспектах воп­ рос динамики гликогена в гонадах изучен у гольяна /immers, 1952/ и пятнистого змееголова /sinha, Mondai, 1981/. Сущест­ вует несколько гистохимических исследований на рыбах, в ча­ стности работа Хиббарда и Пара /Hlbbard, Parat, 1928/ на окуне и девятииглой колюшке, показавши накопление в период трофоплазматического роста диффузных липидов в околоядерно?!

зоне ооцитов. H.A. Буцкой /1966/ изучено распределение липи­ дов в клетках семенника в различные сезоны года у карпом., (сазан, плотва, линь), окуневых (судак, окунь, ери), лососе­ вых (балтийский лосось, горбуна), щуковых (щука) и осетровш (севрюга, стерлядь). Липмдкые включения и их значительны сезонные изменения обнаружены в фолликулярньи клетках семейниха у всех видов осетровых, лососевых и щуковых, но не най­ дены у карповых и окуневых. По мнению автора /Буцкая, 1966/, эти «пидц связаны с питательной функцией. Сезонные измене­ ния липидов в семенниках изучены также у щуки /Lofts, Mar­ shall, 1957/ и пятнистого змееголова /sinha, Mondai, 1981/ .

При анализе наших гистохимических материалов, охватыващих 6-летний период, по содержанию энергетических резер­ вов в гонадах обнаружены межгодовые различия в их сезонной динамике, более ярко выявляющиеся в I976-1978 гг. (рис. 8 и 9). Если в основном эти различия объясняются асннхронностью развития и созревания ооцитов (хотя материал для анализа брали в одинаковых участках яичника), а также относительной неточностью визуальной оценки, то за различия» в сезонной динамике енергетических резервов в I976-1978 гг. (которые, кстати, статистически достоверны при Р г. 0,05), как показы­ вает «»«" совместных гидробиологических, ихтиологических и гидрохимических данных этого периода, стоят резкие изменения экологической обстановки в оз. Выргсъярв (дефицит кормовых объектов, острая пищевая конкуренция леща с угрем и т.д.) /Кангур и др., 1963/ .

Естественно, что ухудиение условий существования поло­ возрелых лещей в озере отражается в первую очередь в более наглядно в снижении жирности, упитанности, а также ГСИ проmsводителей, * лвь в иосмдаш очередь в в и по м ш качествешюств при (размеры • масса ктревюк, содержание внвргетеческех резервов). Кроме того, ухудшаете условен сумеетвованжж отражается более ярко у самок, которые тратят гораздо больме вверг** для заготовке половых продуктов, чем самцы .

Джтература

Буцкая H.A. Цетохемечесвое всследовамее семенников рыб. II .

Лещади. - Архив анат. гястол. е ембреол., 1966, т. 51, вып. 10, с. 81-87 .

Двнелешсо.. Локализация гликоген* в овоцктах карповых рыб в переод созревания в оолодотвореяая. - Гядробиол .

журнал, 1967, т. 3, V 4, с. 56,62 .

Дмшенко Т.П. Jfrmamra гликогена в ооцктах фавн Б у карпа Cyprlnus carpio L. - Вопр. кгтвол., 1972, т. 12, вып.2 (73), с. 329-335 .

Кангур А., Кангур К., Нооретс Т. Многолетнее езмененея состоянея поцулецке леще ое. Вцлсъярв. - Tea. XXI конф .

по изуч. внутр. вод Пребадтжкж. Псков, 1963, т.2, с. 76Лаугасте К., Кангур М., Паху Э. Связь веса печени леща в шлема с беологечеокеи цеелом рыб к некоторые абеотеческеме уеловееме. - В кн.: Ввел. ввел, на внутр. водоемах Цребалтвкв. Минск, 1972, с. 230-233 .

Лаугасте К., Керсецуу А., Кангур А. Блеяние петания и темпе­ ратуры воды на некоторнэ гистологические показатели пе­ чени, белки сыворотки крови и биохимический состав имвц у леща. - В кн.: Гвдробиол. вссл. Тарту, 1974, вш. У1, с. 199-206 .

Мильман Л.С., Юровицкк* D.T., Ермолаева Л.П. Контроль угле­ водного обмена на различных стадиях оогенеза.

- В кн.:

Соврем, пробл. оогенеза. М., 1977, с. 250-266 .

Пирс Э. Гистохимия. М., 1962. - 962 с .

Правдин ИЛ. Руководство no изучению рыб (преимущественно пресноводных). М., 1966. - 376 с. / Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника. М., 1957. - 467 с .

Сакун 0.4 .

, Буцкая И.А. Определение стадии зрелости и изуче­ ние половых циклов рыб. - Мурманск: Главрыбвод, 1968, с .

•абадан A.i. Морфологи распределены * превращения глико­ гена. Сообщен* III: ЦИТОЛОГИЯ глжхогеновых накоплен*# в двигательных клетках нормальной нервно* систены. - Бмл .

•кс. бкол.•кед., 1939, т. 7, » 5, с. 418-424 .

Шабадан А.1. Гкстохкмжя гликогена нормальной нервной смсгеж. *., 1949. - 324 с .

•агумовскк* М.Й. Экологические закономерности обмена веществ морсов рнб. 1., I960. - 281 с .

Иатуновсюгё М.И., Богоявленская М.П., Вельтящева ИЛ., Маеленннкова Н.В. Исследование генеративного обмена балтий­ ской треск*. - Тр. ВШРО, 1975, т. 96, с. 97-62 .

Ватуновске* М.И., Богоявленская М.П., Вельтищева ИЛ. и др .

Лкклмктл фезколого-бнохкмкчесгого состояния промысловых рнб, Северо-Восточно* Атлантики в течение яизненного и годичного циклов. - Отчет ОНИ ВШРО, 1972. - 67 с .

Boulekb&che Н. Energy metabolism In fleh development. -Auer .

Zopi., 1981, vol. 21, Ж 2, p. 377-389 .

Hanahan D.I. Lipids ohemistry. lew York, 1960. - 33 p .

Hibbard H., Parat •. Mature of evolution des constituents су™ toplasmatiques de 1'ovocyte de deux Teleosteens. - Bull .

HLet. Appl., 1SZ8, vol. 5, p. 313 .

Hirsch Q.C., van Pelt.Der Rythmus dee Glykogengehalts der Le­ ber dee weissen laus, dargestellt durch die StokfenzahlMstbede. - Proc. Acad. Amsterdam, 1937, vol. 40, p. 6 .

Ieeers I. The Influence of the sexual cycle on the metabolism of glycogen In the lover, gonads aod skin of the stickle­ back (Gasteroateus aouleatue L.) and minnow (Phoxinus laevla Ag.). - 4rH* for Soologl, 1952, В 4, N 17, p€ 327Lofts Ж., latshall A.Y.I. Cyclical changes in the distribution of the teatis lipids of a teleost fish Bsox luciua.-Quart .

J, Петое®. Soi., 1957, vol. 98, p. 79-88 .

Sinha 6»*», londal S.K. Detection and localisation of Alkaline Phosphatase, D*A, Glycogen, Mucopolysaccharides and Bound Hpids in the Teatis of the Teleost Pish, Channa pune ba­ tes (Bloch.) by Histocbemlcal Methods. - Mikroskopie(«.enX '.*ei, vol. 38, p. 228-240 .

–  –  –

Рис. I. Шкалы визуальной оценки относительного содерканяя гликогена ( и лшщцов (II) в ооцштах лева. I: реак­ П ция ШИК. Х280; II: Судан черный Б. Х70 .

–  –  –

Рис. 3. Зернышки гликогена в семеннике лева (конец октя­ бря) Реакция ШИК. X3I0 .

.

Рис. 4. Капельки лшщцов в семеннике леща (ноябрь). Судан черный Б. Х675 .

Рис. 5. Зернышки гликогена ( f) в ооците леща (апрель) .

Реакция ШИК. X3I0. 1 Рис. 6. Липидные включения ( f) в околоядерной зоне ооцита леща (ноябрь). Х280 .

–  –  –

Рис. 9. Сезонные изменения отн. содержания гликогена (А) л липидов (Б) в яичниках (п.к.) леща оз. Выртсъярв в разные годы .

SEASONAL DYNAMICS OP LIPIDS AND GLYCOGEN

IN THE GONADS OP BREAM

T. Soorita Summary The study indicates that the energetic reserves (lipids and glycogen) in gonads of bream have original seasonal dy­ namics,which more or less resemble the dynamics of GSI of fish. In testes deposition of lipids and glycogen begun from July (II stage of maturity). Till August the containing of lipids increases steeply,then stabilizes. Glycogen accumula­ tes gradually, reaching the maximum in November. During win­ ter months (III-IV stage of maturity) the containing of ener­ getic reserves decreases gradually in testes» The lipids ap­ pear in oocytes in July (II stage of maturity). Prom August till September the containing of lipids increases steeply .

Later, from November (IV stage of maturity), no remarkable changes are noticed in their containing. The glycogen appea-e in oocytes not before than at the beginning of March.Se­ cond half of IV stage of maturity) and later it will be de­ posited intensively, getting his maximum level to the spaw­ ning period. The glycogen Is not found In germ cells during other seasons .

–  –  –

Обзор методик, используемых дм индукции созревания и овуляции ооцитов костистых рыб in vitro. Рассматриваются также критерии созревания и овуляции я эффективность разных гормональных воздействий .

Библ. - 77, табл. 5 .

УДК 591.313

–  –  –

У двуполой формы серебряного карася процесс оплодотворе­ ния сходен с таковым у других бисексуальных животных. У од­ нополой (гяногенетнческо!) формы серебряного карася ядро спермин, проникнете в яйцо, изолируется от окружавшей ци­ топлазмы мембранным структурам*; последние, по-видимому, препятствует воздействию цктоплазматических факторов, ответ­ ственных за преобразование ядра спорная в мужской пронуклеус .

Библ. - 29, рас. - 10 .

уда 591.313

ВРЕМЕННЫЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ПРОЦЕССА ОПЛОДОТВО­

РЕНИЯ У КАРПА И СЕРЕБРЯНОГО КАРАСЯ. А л а тс е й A.A. - Учен. зап. Тар», ун-та, 1965, вып. 718.Труди по зояоги* Х1У, с. 42-50 .

Установлена относительная (в числе С» ) продолжитель­ ность и время наступления некоторых стадий процесса оплодо­ творения у карпа и двуполой формн серебряного карася. Прие­ дены данные об изменениях формы и размеров пронухлеусов ж о скорости их погружения в цитоплазму яйца .

Библ. - 15, рис. - 2, табл. - 2 .

уда 591 ТАБЛИЦЫ АСРИОНАЛЬНОГО РАЗВИТИЯдашюидаоя и ТРИПЛОЦДНОИ ФОРМ СЕРЕБРЯНОГО КАРАСЯ. С а в ол а й н е н М.О. - Учен зап. Тарт. ун-та, 1985, вып. 718. Труды по зоологии Х1У, с. 51Составлены таблицы нормального развития для диплоидной и триплоидной (гиногенетической) форм серебряного карася. Вы­ делено 40 стадий развития. На всех стадиях зародыши двух форм имели сходное строение. Время наступления стадий разви­ тия выражено в единицах относительной характеристики продол­ жительности развития - в числе 0. Начиная с гаструляции, наступление одноименных стадий развития у триплоидной формы происходило несколько (до 2-4 to, выяупление - б С о) рань­ ше, чем у диплоидной формы .

Библ. - 7. рис. - I, табл. - I .

Уда 597.554.3 : 591.166

–  –  –

Динамика массы ацетонированных гипофизов (МАГ) полово­ зрела лещей в основном совпадает с динамикой гонадосоматического индекса (ГСП). В преднерестовый период средняя МАГ у самок со средней массой порки 590+30 г составляет 1,98+ +0,11 мг, а у самцов (средняя масса порки 568+20 г) соответ­ ственно 1,51+0,06 кг. В разные сезоны года МАГ самок леща достоверно вше МАГ самцов. Масса гипофиза леща связана с размерами (г * +0,59), массой (г» +0,67) и возрастом (г =

- +0,38) рыб. Наблюдается тесная корреляция (г - +0,70 при Р 0,01) мезду МАГ и индивидуальной абсолютной плодовито­ стью. Уровень связи между МАГ и ГСИ составлял +0,46 .

ПЕЛ. - I, табл. - I, библ. - 13 .

УДС 597.554.3 : 591.166 .

–  –  –

С помощью гистохимических методов исследовали динамику липидов ж гликогена (энергетических резервов) в гонадах ле­ ща. Показано, что им свойственна своеобразная сезонная дина­ мика, в большей или меньшей степени совпадавшая с динамикой гонадосоматического индекса. Полагают, что межгодовые разли­ чия в динамике энергетических резервов, наиболее ярко выяв­ ляющиеся в 1976-1978 гг., обусловлены резким изменением эко­ логической обстановки в оэ. Выртсъярв .

Илл. - 9, библ. - 23 .






Похожие работы:

«МИНИСТЕРСТВО ОХРАНЫ ЗДОРОВЬЯ УКРАИНЫ ЗАПОРОЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Кафедра медицинской биологии, паразитологи и генетики ПОПУЛЯЦИОННО-ВИДОВОЙ, БИОГЕОЦЕНОТИЧЕСКИЙ И БИОСФЕРНЫЙ УРОВНИ ОРГАНИЗАЦИИ ЖИЗНИ Учебно-методическое пособие по мед...»

«БЕСКОВ Артем Александрович ВАРИАНТЫ  СТРОЕНИЯ  СПЕРМАТОЗОИДОВ  ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ, КРИТЕРИИ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ УСПЕШНОСТИ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО  ОПЛОДОТВОРЕНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВАННОГО ПОДХОДА К ДИ...»

«Ископаемые водоросли УДК 551.77:561.26(265.2) В.С. ПУШКАРЬ1,3, М.В. ЧЕРЕПАНОВА2, О.Ю. ЛИХАЧЕВА1 Дальневосточный геологический ин-т ДВО РАН, пр. 100-летия Владивостока, 159, Владивосток 690022, Россия Биолого-почвенный ин-т ДВО РАН, пр. 100-летия Владивостока, 159, Владивосток 690022, Россия Дальневосточный федеральный ун-т,...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ Кафедра клеточной биологии и биоинженерии растений ЯН ГАН МОДИФИКАЦИЯ СПЕРМИНОМ РОСТОВЫХ ПРОЦЕССОВ ПРОРОСТКОВ ЯЧМЕНЯ ПРИ ДЕЙСТВИИ СТРЕССОВЫХ ФАКТОРОВ Магистерская диссертация специальность 1-31 80 01 "Биология" Н...»

«СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ БИОЛОГИЯ, 2017, том 52, 2, с. 232-241 УДК 636.082:591.463.1:57.086/.087 doi: 10.15389/agrobiology.2017.2.232rus НОВЫЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА СПЕРМЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СИСТЕМЫ CASA (сomputer-assisted...»

«Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых, аспирантов и студентов "Экология и безопасность в техносфере: современные проблемы и пути решения" Выводы 1. В результате исследования было установлена инте...»

«Сушилка\Холодильник кипящего слоя Сушка, охлаждение, обжиг, придание растворимых свойств, агломерация, кристаллизация, кондиционирование, дополнительное кондиционирование, кальцинирование порошкообразных и зернистых продуктов VIBRA MASCHIN...»

«П. А, Мавродиади Созревание и оплодотворение у нематоды Cystoopsis acipenseri N. Wagn1. ) (Из Гистологического Института Белорусского Госуд. Университета в Минске). Причины, побудившие меня взяться за изучение полового процес­ са у нематоды Cystoopsis acipenseri N. Wagn.3 находятся в непосред­ ), ственн...»

«ГРУНТОВЕДЕНИЕ БИОТЕХНОЛОГИИ В ИНЖЕНЕРНОЙ ГЕОЛОГИИ BIOTECHNOLOGIES IN ENGINEERING GEOLOGY MAKSIMOVICH N.G. МАКСИМОВИЧ Н.Г. Head of the Laboratory of Technogenic Processes Geology and deputy Заведующий лабораторией геологии техногенных процессов и science director of the Institute of Nat...»

«Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный юридический университет имени О.Е. Кутафина (МГЮА)" ПРОГРАММА кандидатского экзамена по специальности 12.00.06 –...»







 
2018 www.lit.i-docx.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.