WWW.LIT.I-DOCX.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - различные публикации
 

«I 05002226 ПОСПЕЛОВ АЛЕКСЕЙ ЛЬВОВИЧ РОЛЬ МУТАЦИЙ НЕКОТОРЫХ ГЕНОВ ЕСТЕСТВЕННОГО И ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНИТЕТА В ТЕЧЕНИИ ВПЕРВЫЕ ВЫЯВЛЕННОГО ТУБЕРКУЛЕЗА У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ. ...»

/

/

I

"05002226

ПОСПЕЛОВ АЛЕКСЕЙ ЛЬВОВИЧ

РОЛЬ МУТАЦИЙ НЕКОТОРЫХ ГЕНОВ ЕСТЕСТВЕННОГО И

ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНИТЕТА В ТЕЧЕНИИ ВПЕРВЫЕ

ВЫЯВЛЕННОГО ТУБЕРКУЛЕЗА У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ .

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук ^ 7 НОЯ 2011 Москва -2011 Работа выполнена в лаборатории клинической иммунологии отдела иммунологии Центрального НРШ туберкулеза .

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук Авербах Михаил Михайлович

Научный консультант:

Доктор медицинских наук Губкина Марина Федоровна

Официальные онионенты:

Доктор медицинских наук, профессор Ляшенко Всеволод Андреевич Кандидат биологических наук Афанасьев Константин Иванович Ведущая организация: Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом Защита диссертации состоится « /. / у » 2011 г. в г ^ ' ' часов на заседании диссертационного совета Д 208.046.02 в Федеральном бюджетном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им Г. Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации по адресу: 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10 .

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н .

Габричевского, г.Москва .

Автореферат разослан « » 2011 г .

Ученый секретарь диссертационного совета, к.м.н. Новикова Л. И .

Общая характеристика работы Актуальность проблемы Эпидемическая обстановка по туберкулезу (ТБ) в России остается напряженной на протяжении последних двух десятилетий. Это связано с тем, что имеется большое число не выявленных и не излеченных больных туберкулезом, являющихся источником инфекции [Шилова М.В., 2008] .

Регистрируемая заболеваемость существенно различается в субъектах Российской Федеращ1и. Самые высокие показатели как территориальной заболеваемости (229,3/100 тыс. населения), так и заболеваемости постоянного населения (180,9/100 тыс.) зарегистрированы в 2009 г. в Республике Тыва. Они превышают среднероссийские показатели (82,6 и 66,8 на 100 тыс. населения, соответственно) в обоих случаях в 2,7 раза (Аналитический обзор по туберкулезу в Российской Федеращ1и, 2009). При оценке эпидемиологических показателей по туберкулезу большое внимание уделяется заболеваемости детей и подростков, которая наиболее достоверно отражает напряженность ситуации по туберкулезу [Аксенова В.А. и др., 2002; Овсянкина Е.С. и др., 2008; Чернеховская Н.Е. и др., 2008] .

Известно, что туберкулез является мультифакториальным заболеванием .

Исход первичной встречи микобактерии туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis) (МБТ) с организмом (человеком) зависит от состояния иммунной системы. Дети и подростки относятся к категории, характеризующейся повышенным риском развития туберкулезной инфекции, поскольку у детей происходит возрастное становление иммунной системы, а в подростковом возрасте происходит физиологическая перестройка гормональной системы [Бережков Л.Ф., 1984] .

Концепщ1Я генетической предрасположенности к туберкулезу получила подтверждение благодаря целому ряду исследований [Newpor M.J. et al., 1995;





Aleis A. et al., 2005]. При проведении популяционных исследований было показано, что неблагоприятное течение туберкулеза у больных различных национальностей наблюдается при наличии определенных антигенов HLA [Поспелов Л.Е. и др., 1987, 2003; Садыков А.С. и др.,]999]. Также изучались различные мутации генов естественного и приобретенного иммунитета и их ассоциация с туберкулезом [Bellamy R. et al., 1998; Lopez-Maderuelo D. et al., 2003; McAdam K.P.W.J., 2004]. Полученные в этих исследованиях результаты были неоднозначны, поскольку аллельные варианты, которые ассоциировались с туберкулезом в одной популяции, не всегда прослеживались на других .

Изучение уровня цитокинов показало, что в антимико бактериальной защите важную роль играют различные цитокины: IFNy, IL-2, TNFa, IL-ip, IL-10, TGFp, IL-8 [Маянский Л.Н., 2003; Yamada H. et al., 2000; Smith S. et al., 2002; Li H.T. et al., 2006]. Однако в зависимости от характера течения заболевания уровень цитокинов в сыворотке больного изменяется поразному .

Работ, которые включали бы в себя одновременно иммунологические, генетические и клинические исследования в оценке развития впервые выявленного туберкулезного процесса у детей и подростков нами не выявлено .

В связи с этим, актуально проведение комплексного исследования, направленного на изучение взаимосвязи аллелей генов естественного и приобретенного иммунитета с уровнем продуцируемых цитокинов и различными клиническими параметрами туберкулезного процесса у детей и подростков .

Цель работы: определение роли полиморфизма генов естественного и приобретенного иммунитета в течении туберкулеза у детей и подростков .

Задачи исследования:

1. Определить полиморфизм генов Nrampl, IFNy, IL-10 и сопоставить частоты аллелей и генотипов, ассоциирующихся с туберкулезом, у здоровых и больных туберкулезом детей и подростков тувинской и европейской популяций .

2. Сравнить содержание провоспалительных (IFNy, TNFa, IL-ip) и противовоспалительного (IL-10) цитокинов в сыворотке крови у больных туберкулезом тувинской и европейской популяций до начала противотуберкулезной химиотерапии .

3. Изучить динамические изменения содержания цитокинов (IFNy, TNFa, ILl-P и IL-10) на разных этапах лечения больных туберкулезом в европейской популяции и определить их роль в оценке эффективности проводимой химиотерапии .

4. Изучить корреляцию между аллелями генов IFNy, IL-10, уровнем содержания цитокинов в крови и клиническими характеристиками туберкулеза у больных европейской популяции .

Научная новизна Впервые показано, что гомозигота по аллелю С сайта INT4 гена Nrampl и гомозигота по аллелю Т сайта +874 гена IFNy достоверно чаще встречаются у здорового контингента европейской части России, по сравнению с больными ТБ детьми и подростками .

Впервые показано, что гомозигота по аллелю А сайта +874 гена IFNy достоверно чаще встречается у больных ТБ детей и подростков европейской популяции по сравнению с не болеющими ТБ. В тувинской популящ1и этот генотип имеется у большинства больных и контактирующих с больными туберкулезом детей и подростков .

Впервые показано, что у больных туберкулезом на фоне отсутствия «резистентных» генотипов (генотип С/С сайта INT4 гена Nrampl и генотип Т/Т сайта +874 гена IFNy), при генотипах А/А и А/Т сайта +874 гена IFNy уровень цитокина различен и сочетается со степенью тяжести туберкулезного процесса. Так, при генотипе А/А в группе со скудной клинической картиной уровень IFNy был достоверно ниже, по сравнению с группой с выраженной клинической картиной. Уровень IFNy в группе со скудной клинической картиной при генотипе AJA был достоверно ниже, по сравнению с генотипом А/Т .

Практическая значимость В клинической практике данные об аллельных вариантах геновкандидатов подверженности туберкулезу могут применяться для формирования групп риска по заболеванию туберкулезом .

Данные, полученные при анализе динамических изменений уровней провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в процессе лечения, могут служить дополнительным оценочным критерием успешно проводимой химиотерапии туберкулеза .

Основные положения, выносимые на защиту:

• Дети и подростки тувинской популяции характеризуются низкой частотой встречаемости генотипа С/С сайта 1NT4 гена Nrampl и генотипа Т/Т сайта +874 гена IFNy, повышенной частотой встречаемости аллеля А сайта D543N по сравнению с европейской популяцией .

• У детей и подростков европейской части России генотип С/С сайта ШТ4 гена Nrampl и генотип Т/Т сайта +874 гена IFNy ассоциируются с «резистентностью» к туберкулезу. Б группе не болеющих туберкулезом детей и подростков тувинской национальности данные генотипы встречаются крайне редко, что может косвенно влиять на тяжелую эпидемическую ситуацию в Республике Тыва .

• Динамическое снижение уровня IFNy в процессе лечения отражает снижение активности туберкулезного процесса в ходе проведения эффективной противотуберкулезной терапии .

• У детей и подростков из европейской части России генотипы А/А и А/Т сайта +874 гена IFNy в разной степени влияют на уровень сывороточного IFNy до начала лечения. При генотипе А/А в группе со скудной клинической картиной уровень IFNy был достоверно ниже, по сравнению с группой с выраженной клинической картиной. Уровень IFNy в группе со скудной клинической картиной при генотипе А/А был достоверно ниже, по сравнению с генотипом А/Т .

Внедрение результатов работы. Результаты диссертационного исследования по уровню цитокинов внедрены в лечебный процесс и используются как дополнительный оценочный критерий успешно проводимой химиотерапии туберкулеза в дстско-подростковом отделе ЦНИИТ РАМН. Материалы диссертационного исследования вошли в лекционных курс повышения квалификации специалистов в Учебном Центре ЦНИИТ РАМН .

Апробация работы проведена 17 февраля 2011 на заседании отдела иммунологии ЦНИИ туберкулеза РАМН Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции молодых ученых «Новые технологии в эпидемиологии, диагностике и лечении туберкулеза взрослых и детей» ЦНИИТ РАМН (Москва, 2009; Москва, 2010; Москва, 2011), на ученом совете ЦНИИТ РАМН (25.10.2010 г., Москва), на XX Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Москва, 2010), на «Workshop: Research opportunities in ТВ drug discovery and diagnostics» (Moscow, 2010) .

Публикации По теме диссертации опубликовано 8 работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ .

Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 118 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения и выводов. Данные проиллюстрированы 4 схемами и 36 таблицами. Библиографический указатель включает 210 источников, из них 49 работ отечественных авторов .

Содержание работы Материалы и методы исследования Были обследованы образцы крови детей и подростков, больных туберкулезом и контактирующих с больными ТБ, тувинской националыюсти

- всего 118 человек. Образцы крови больных собирались в Республиканском противотуберкулезном диспансере Республики Тыва (г. Кызыл, всего 61 человек), образцы группы контактирующих с больными ТБ собирались в противотуберкулезном санатории «Балгазын» (всего 57 человек). В группе детей и подростков женского пола было 48 человек, а мужского пола 70 человек. Возраст в общей группе больных имел диапазон от 3 до 17 лет .

Из европейской популяции были обследованы больные дети и подростки, находящиеся на стационарном лечении в Центральном НИИ Туберкулеза РАМН (ЦНИИТ РАМН) (135 впервые выявленных больных туберкулезом). В группе детей и подростков женского пола было 68 человек, а мужского пола 67 человек. Возраст в общей группе больных имел диапазон от 4 до 17 лет .

Группа контроля (для генетического исследования) европейской популяции, не болеющая туберкулезом, набиралась в Российской детской клинической больнице (дермато-аллергологическое отделение), а также среди детей и подростков из Ц Ш И Т, у которых не был установлен диагноз туберкулез. Общее число детей и подростков в контрольной группе составило 51 человек. В группе детей и подростков женского пола было 22 человека, а мужского пола 29 человек. Возраст детей и подростков в группе контроля имел диапазон от 4 до 17 лет .

Для молекулярного генотипирования образцы периферической крови (3мл) больных туберкулезом и здоровых детей и подростков собирались и помещались в пробирки с EDTA. ДНК выделялась из 200 мкл крови пациентов с помощью наборов для выделения ДНК (Magna DNA Prep 200) фирмы ООО «Лаборатория Изоген» (Россия) .

Для полимеразной цепной реакции (ПЦР) использовали набор реагентов для амплификации ДНК «GenePak PCR Core» ООО «Лаборатория Изоген», содержащий ингибированную для «горячего старта» Taq ДНК полимеразу, дезоксинуклеозид трифосфаты и хлорид магния с конечными концентрациями, соответственно, lu, 200 мкМ и 2,5 т М, а также оптимизированную буферную систему для проведения ПЦР. Конечная концентрация праймеров в реакции 0,1-0,5 мкМ, объем 5 мкл, количество ДНК 50-100 иг, объем 5 мкл. Исследуемые аллельные варианты представлены в таблице А .

Таблица А. Исследуемые полиморфные сайты .

Ген Полиморфные Локализация Литература сайты в гене NRAMP1 469+14 G/C (INT4) Интрон 4 Soborg С. et al., 2002 .

D543N Экзон 15 IFN-Y +874 А/Т Интрон 1 Vidyarani M.et al., 2006 .

IL-10 -1082 A/G Промотер Hyoung Doo Shin et.al., 2005 .

Определение уровня цитокинов INFy, TNFa, IL-1|3 и IL-10 в сыворотке периферической крови проводилось методом ИФА, с помощью наборов фирмы «Вектор-Бест» (Россия). Венозную кровь набирали в чистую пластиковую пробирку. Для образования сгустка кровь оставляли на 30 мин час при комнатной температуре или помещали в термостат при 37°С .

Образовавшийся сгусток крови отделяли от стенок стеклянной палочкой .

После этого кровь центрифугировапи 10-15 мин при 1500 об/мин .

Полученную сыворотку переносили в другую чистую пробирку и замораживали при -80°С. За контроль уровня цитокинов были взяты данные условно здоровых доноров (п=68), представленные фирмой производителем наборов для ИФА .

Распределение генотипов по исследованным локусам проверялось на соответствие ожидаемым при равновесии Харди-Вайнберга. Для анализа ассоциации туберкулеза с маркерами исследуемых генов использовали критерий при сравнении групп, в которых было менее 50 человек, подсчет осуществлялся с помощью с поправкой Йетса на непрерывность, при числе степеней свободы, равном 1. Расчет всех параметров производился в программе Microsoft Excel 2007, с использованием таких элементов описательной статистики как: измерение медианы, среднего, стандартного отклонения, стандартной ошибки, внутригрупповых дисперсий, расчета доверительных интервалов, а также двухвыборочный t-тест. Также производился расчет отношения шансов и относительного риска .

Результаты исследования и обсуждение Встречаемость некоторых аллелей генов NRAMP1, INFy и IL-10 у больных туберкулезом детей и подростков и контактирующих с больными ТБ Республики Тыва и у больных и здоровых инфицированных детей и подростков из европейской части России .

Распределение частот аллелей (табл. 1) в единичных мутациях генов NRAMP1, IFNy и 1L-10 в тувинской популяции показало, что разницы между группой больных детей и подростков, и контактирующими с больными по частоте распределения аллелей не наблюдалось. При этом показатели их частоты были практически одинаковыми. В европейской популяции встречаемость тех же аллелей показала идентичную картину с тувинской популяцией. Но между собой популяции отличались по частоте встречаемости отдельных аллелей. Так, в тувинской популяции достоверно чаще встречается аялель А сайта D543N гена NRAMP1 и достоверно реже аллель Т сайта +874 IFNy, по сравнению с европейской, в которой аллель Т достоверно чаще встретился в группе здоровых инфицированных детей и подростков, в сравнении с больными туберкулезом .

Таблица 1. Распределение частот генов-кандидатов в тувинской и

–  –  –

При сравнении генотипов сайта ШТ4 гена NRAMP1, D543N гена NRAMP1, +874 гена IFNy и 1082 гена IL-10 в тувинской популяции оказалось, что разницы между больными ТБ и контактирующими с больными ТБ детьми по частоте встречаемости генотипов по каждой мутации не обнаружено. В обеих группах наблюдалась практически одинаковая частота встречаемости указанных генотипов (Рис. 1 -4) .

В европейской популяции, при сравнении тех же мутаций между группами больных и здоровых инфицированных детей и подростков (Рис. 1показано достоверное различие в следующих генотипах: генотип С/С сайта 1NT4 гена NRAMP] (Рис. 1) и два генотипа сайта +874 гена IFNy - А/А и Т/Т (Рис.3). Так генотип С/С мутация INT4 гена NRAMP] и генотип Т/Т сайта +874 гена IFNy достоверно чаще встречались в группе здоровых инфицированных детей и подростков, по сравнению с больными туберкулезом (х'=6,45, р0,05; х^=4,26, р0,05). Для генотипа С/С сайта INT4 гена NRAMP1 OR=0,088, а для генотипа Т/Т сайта +874 гена IFNy OR=0,]7 .

При этом, чем меньше значении OR по отношению к единице (0R1), тем выше протективные свойства генотипа .

Генотип А/А сайта +874 гена IFNy достоверно чаще встречался в группе больных туберкулезом детей и подростков, по сравнению со здоровыми инфицированными (х^ =5,34, р0,05), при этом OR=3,68, а RR=2,32 .

–  –  –

-АЛ 2% 3% 0% 1%

–  –  –

67% 56% 25% 16% 16% 0% 0%

–  –  –

70% 57% 57% 51% 47% 43% 1%

–  –  –

Нам представляется, что генотип С/С сайта INT4 гена NRAMP] и генотип Т/Т сайта +874 гена IFNy, достоверно чаще встречающиеся у здоровых детей и подростков, проживающих на европейской части России, могут рассматриваться как генотипы «резистентности» к туберкулезу. Стоит учитывать, что это только генотип одной мутации, а не гаплотип всего гена .

Как ассоциируются остальные генотипы конкретного гена с туберкулезом пока еще не изучено .

В то время как по данным нашего исследования генотип Т/Т сайта +874 гена IFNy можно рассматривать как генотип «резистентности», генотип А/А сайта +874 гена IFNy можно рассматривать как генотип «чувствительности»

к туберкулезу. Так, генотип А/А сайта +874 гена IFNy достоверно чаще встречался у больных туберкулезом детей и подростков по сравнению со здоровыми инфицированными, проживающими на европейской части России, а в тувинской популяции частота генотипа А/А доминировала над генотипом А/Т в обеих группах (больные и контакты по туберкулезу) .

Связывая избыточное наличие в тувинской популяции чувствительного генотипа А/А сайта +874 гена IFNy и отсутствие резистентного генотипа С/С сайта INT4 гена NRAMP1 и генотипа Т/Т сайта +874 гена IFNy, возможно предположить, что они оказывают влияние на сложившуюся тяжелую эпидемиологическую ситуацию в Республике Тыва. При этом данные генотипы ассоциируются с заболеваемостью туберкулезом в целом, а не с какими-то отдельными его формами .

Таким образом, проанализировав полученные результаты можно говорить о том, что генотип С/С сайта INT4 гена NRAMP1 и генотип Т/Т сайта +874 гена IFNy достоверно чаще встречаются у здорового контингента (детей и подростков), проживающего на европейской части России, и могут рассматриваться как гены резистентности к туберкулезу. Отсутствие этих генотипов у детей и подростков туви11ской популяции свидетельствует в пользу возможной повышенной чувствительности к туберкулезу лиц тувинской национальности. Данные генотипы отсутствовали в исследуемой группе, однако они встречаются в тувинской популяции .

Генотип А/А сайта +874 гена IFNy достоверно чаще встречался у больных детей и подростков, проживающих на европейской части России, а в тувинской популяции частота данного генотипа доминировала в группах больных и контактах. Исходя из этих данных, можно говорить о том, что генотип А/А, возможно, играет роль в чувствительности к туберкулезу .

Исследованные мутации гена IL-10 (-1082) и гена NRAMP1 (D543N) не показали ассоциаций с туберкулезом. Аллель А сайта D543N гена NRAMPI чаще встречался у детей и подростков из Республики Тыва, по сравнению с детьми проживающими на европейской территории России. Тем самым он может являться специфическим маркером популяции, но при этом никак не влияющим на чувствительность или резистентность к туберкулезу .

Уровень содержания цитокинов IFNy, TNFa, IL-ip и IL-10 и их динамические изменения в процессе химиотерапии в зависимости от клинических параметров у детей и подростков из Республики Тыва и европейской части России .

Уровень цитокинов определялся до начала лечения у детей и подростков, больных туберкулезом из Республики Тыва и проживающих на европейской части России. Также определяли уровень цитокинов в процессе лечения у детей и подростков европейской части России (для детей и подростков из Республики Тыва измерение уровня цитокинов в динамике не проводилось) .

Уровень цитокинов (IFNy, TNFa, IL-ip и IL-10) в тувинской популяции, до начала лечения, показал достоверное различие только по одному цитокину IL-ip - между группами контактов и больных туберкулезом детей и подростков, р0,05 (табл. 2). По остальным цитокинам разницы между этими двумя группами не было обнаружено. В ходе исследования при сравнении взаимосвязи уровней цитокинов сыворотки крови и клинических параметров были получены неоднозначные, хотя и достоверные по ряду параметров, данные, но они не всегда совпадали с характером клинической картины заболевания. Это, скорее всего, связано с наличием паразитарных и дерматологических заболеваний, часто встречающихся у детей и подростков тувинской национальности. Данные заболевания могут кардинально изменить цитокиновый фон пациентов .

–  –  –

В связи с тем, что в группе контроля детей и подростков европейской популяции имелись различные соматические и остро-бронхиальные заболевания, за контроль уровня цитокинов были взяты данные условно здоровых доноров (п=68), представленные фирмой производителем наборов для ИФА. Контрольную группу из числа здоровых детей и подростков не набирали из этических соображений .

Уровень IFNy, TNFa, IL-ip и IL-10 в целом в группе больных туберкулезом европейской части России до начала лечения многократно превышал контрольные значения содержания цитокинов в сыворотке, указанные фирмой производителем тест-систем. Уровень IFNy и IL-10 достоверно снижался к 6-му месяцу пребывания в стационаре вследствие успешной противотуберкулезной химиотерапии, IL-ip не претерпевал существенных изменений, а уровень TNFa достоверно возрастал (табл. 3) .

Среди изученных цитокинов (IFNy, TNFa, IL-ip и IL-10) динамические изменения IFNy у детей и подростков оказались наиболее показательными. В общей группе больных ТБ, при группировке по типу начала заболевания были выделены следующие типы: бессимптомное, подострое и острое. При этом уровень IFNy был наиболее высоким до лечения при остром типе начала заболевания и достоверно снижался в процессе успешного лечения во всех трех группах (табл. 4), что повторяет тенденцию изменения IFNy в группе больных в целом .

–  –  –

Таким образом, мы исследовали уровень сывороточных цитокинов IFNy, IL-l, IL-10 и TNFa у больных различными формами туберкулеза детей и подростков европейской части России в динамике (при поступлении и через 3 и 6 месяцев пребывания в стационаре) и у больных и группы контактирующих с больными туберкулезом детей и подростков республики Тыва .

Уровень указанных цитокинов в целом в группе больных туберкулезом европейской части России до начала лечения многократно превышал контрольные значения содержания цитокинов в сыворотке, указанные фирмой производителем тест-систем. Уровень IFNy и LL-10 достоверно снижался к 6-му месяцу пребывания в стационаре вследствие успешной противотуберкулезной химиотерапии, IL-I не претерпевал существенных изменений, а уровень TNFa достоверно возрастал. При группировании больных по типам начала заболевания (бессимптомное, подострое и острое) или формам легочного туберкулеза (ИТ, ОТ, ТВГЛУ и «другие формы ТБ») и фазам процесса (инфильтрация, кальцинация и уплотнение) тенденции в изменении содержания IFNy, IL-10 и TNFa соответствовали таковым в группе больных в целом. Уровень IL-l достоверно снижался при успешном лечении туберкулеза с острым началом заболевания и при лечении таких форм как ИТ, ОТ, и «другие формы ТБ». При лечении ТВГЛУ уровень IL-l не изменялся. При анализе уровня цитокинов в зависимости от наличия МБТ выяснилось, что до начала лечения уровень всех цитокинов у больных с наличием МБТ в мокроте не имел различий с больными, у которых нет МБТ выделения .

Уровень IFNy и IL-10 у больных МБТ+ и МБТ- достоверно снижался в процессе лечения, уровень TNFa достоверно повышался к шестому месяцу химиотерапии лишь у больных МБТ-, а уровень IL-ip оставался неизменным. Влияние фактора наличия распада легочной ткани не отразилось на уровне содержания цитокинов. При изучении влияния фактора туберкулиновой реакции на уровень цитокинов (дети с умеренной реакцией, дети с выраженной реакцией и дети с гиперпробой) выяснилось, что достоверной разницы между уровнем всех цитокинов в трех группах не было. Тенденция изменения уровня цитокинов соответствовала обшей группе больных ТБ .

Дети и подростки из Тывы, больные различными формами туберкулеза и контактирующие с больными были обследованы однократно. Уровень всех изученных цитокинов был выше нормы. Отмечено, что уровень IL-ip достоверно выше у больных ТБ по сравнению с контактирующими с больными ТБ, уровни остальных цитокинов не различались .

Сопоставление генетических вариантов мутаций, показателей цитокинов (IFNy, IL-IO) и клинических параметров у детей и подростков с впервые выявленным туберкулезом .

При сопоставлении клинического параметра «объем поражения легочной ткани», изучаемого локуса и уровня цитокина показано, что группа с малой формой и мутацией +874 гена IFNy с генотипом А/Т имеет более высокий уровень JFNy до начала лечения, по сравнению с генотипом А/А той же мутации и эта разница статистически достоверна ( р=0,05) (табл.6). Для группы с ограниченной и распространенной формой туберкулеза такого различия не было обнаружено .

При изучении уровня IFNy у больных европейской части России в зависимости от фазы туберкулезного процесса было показано его снижение к 6-му месяцу пребывания в стационаре (табл. 5). Изучение влияния генотипа с А/А мутацией +874 гена IFNy на его концентрацию в крови показало, что до лечения он наиболее высокий в фазе инфильтрации и достоверно ниже в фазе уплотнения, и снижается в процессе лечения. При генотипе А/Т уровень IFNy, наоборот, до лечения наиболее высокий в фазе уплотнения и достоверно ниже, чем в фазе инфильтрации и кальцинации (р=0,04). Кроме того, при генотипе А/Т уровень IFNy у больных с процессом в фазе уплотнения достоверно выше, чем с генотипом А/А мутацией +874 гена IFNy (табл. 7) .

–  –  –

- достоверные различия уровня IFNy в группе уплотнение, р0,05 .

П р и г р у п п и р о в к е б о л ь н ы х по типу н а ч а л а з а б о л е в а н и я ( б е с с и м п т о м н о е, п о д о с т р о е и острое) и и з у ч е н и и у н и х у р о в н я IFNy б ы л о п о к а з а н о его наиболее высокое значение при остром типе начала заболевания и достоверное снижение в п р о ц е с с е у с п е ш н о г о л е ч е н и я во всех т р е х г р у п п а х (табл. 4). Н а л о ж е н и е на эти ф а к т о р ы г е н о т и п а сайта + 8 7 4 гена IFNy показало отсутствие какого-либо в л и я н и я г е н о т и п а на у р о в е н ь IFNy п р и р а з л и ч н о м т и п е н а ч а л а заболевания .

Мы выделили две группы больных, имеющих диаметрально противоположные клинические проявления туберкулеза, с целью сравнения генотипов сайта +874 гена IFNy и -1082 гена IL-JO, уровня IFNy и 1L-10 в сыворотке крови и клинической картины заболевания. Первая группа из 10 больных туберкулезом детей и подростков имела следующие характеристики туберкулезного процесса: острое начагю заболевания, наличие фазы инфильтрации, распада, выделение МБТ. Основной формой туберкулеза в этой группе являлся ИТ - 60%, также присутствовали кавернозный и фиброзно-кавернозный туберкулез. Во второй группе заболевание имело бессимптомное начало, процесс находился в фазе уплотнения, отсутствовал распад легочной ткани, МБТ не выделялись (8 человек). Основной формой туберкулеза в этой группе являлся ОТ - 75%, больные с туберкулемой - 25% .

Несмотря на то, что у больных второй группы заболевание выявлено на этапе обратного развития туберкулезного процесса (фаза уплотнения), активность туберкулезной инфекции подтверждалась результатами клинпколабораторного обследования. Из представленного материала видно, что в первой группе с выраженной клинической картиной (табл. 8) уровень IFNy при генотипе А/Т сайта +874 гена IFNy на момент поступления в клинику был на 10% выше, по сравнению с уровнем IFNy при генотипе А/А, однако малое число наблюдений не позволило показать достоверность указанной тенденции в уровне IFNy. Доля генотипа А/А сайта +874 гена IFNy составила 80% и по 10% пришлось на генотипы А/Т и Т/Т. Генотип А/А и A/G сайта

–  –  –

' - достоверное различие в уровне IFNy до лечения при генотипе А/А между двумя группами (см. табл.11), р=0,005 +874 гена IL-W не оказывал влияния на уровень IL-10 в сыворотке и не прослеживалось взаимного регулирования в уровне сывороточного IFNy и IL-10 .

Во второй группе больных с более благоприятной клинической картиной (табл. 9) уровень IFNy при генотипе А/Т сайта +874 гена IFNy на момент поступления в клинику был в 1,75 раза (р=0,023) выше, по сравнению с уровнем IFNy при генотипе А/А. Доля генотипов А/А и А/Т сайта +874 гена IFNy составила по 50%. Влияния генотипа А/А и A/G, сайта +874 гена IL-IQ на уровень IL-10 в сыворотке не прослеживалось .

–  –  –

группами (см. табл. 10), р=0,005 достоверная разница, р=0,023 Сравнение первой и второй групп больных, имеющих генотип А/Т сайта +874 гена IFNy, не дало достоверных различий в уровне сывороточного IFNy, хотя тенденция этого процесса наметилась. Для генотипа А/А разница между двумя сравниваемыми группами была статистически достоверной (р=0,005). Так, у больных первой группы, с выраженной клинической картиной, уровень IFNy был выше в 1,4 раза, по сравнению со второй группой, имеющей слабую выраженность клинической картины .

Сопоставив между собой группу больных с острым началом заболевания, фазой инфильтрации, наличием распада легочной ткани и МБТ(+) и группу с бессимптомным началом заболевания в фазе уплотнения, без распада и МБТ(-), мы установили, что без учета конкретного полиморфизма обе эти группы по изменению уровня цитокинов повторяют данные по каждому отдельному клиническому параметру Таким образом, с учетом генотипов уровень IFNy до начала лечения не имел достоверных различий между генотипом А/А сайта +874 гена IFNy и генотипом А/Т и Т/Т в группе с выраженной клинической картиной. Иная картина наблюдалась при меньшей степени выраженности клинической картины, там уровень IFNy был достоверно выше при генотипе А/Т сайта +874 гена IFNy и ниже при генотипе А/А этой же мутации, р=0,023. Между собой генотипы в двух группах также отличались. Достоверную разницу (р=0,005) наблюдали между генотипом А/А в двух группах с диаметрально противоположными клиническими характеристиками до лечения. Для генотипа А/Т разница в уровне цитокина IFNy составила менее 5% и не была достоверной из-за малого числа наблюдений. По нашим данным, генотип А/А ассоциируется с туберкулезом, и в группе с более тяжело протекающими процессами он был представлен в 80% случаев, что в 1,6 раз чаще, чем в группе больных, имеющих скудную клиническую симптоматику (50%). Это косвенно может указывать на то, что генотип А/А на начальных этапах заболевания слабее проявляет свои свойства, по сравнению с генотипом А/Т, позволяя инфекции проявить выраженньп"! характер. В то же время нельзя игнорировать другие локусы гена IFNy, которые также могут влиять как на уровень IFNy, так и на ассоциацию с туберкулезом, т.к. один полиморфизм не может играть единоличную роль в этих процессах .

После начала химиотерапии показатели уровня IFNy между группами и между генотипами в этих группах достоверных отличий не имели, это свидетельствует о том, что на инфекцию в первую очередь влияют химиопрепараты, а иммунный ответ на инфекционное начало отходит на второй план. Установлено, что основная разница в уровне цитокина наблюдалась при естественном развитии инфекции еще до начала лечения .

Динамические измерения уровня 1L-10 при генотипах А/А и A/G сайта +874 гена IL-10 в группах сравнения показали изменения в уровне цитокина, сходные с общей группой больных. Уровень IL-10 достоверно снижался к шестому месяцу лечения. Влияния данного генотипа на уровень IL-10 не выявлено .

Выводы

1. Генотип С/С сайта INT4 гена NRAMP1 и генотип Т/Т сайта +874 гена IFNy достоверно чаще встречаются у здорового контингента европейской части России (8% и 8%, соответственно) по сравнению с больными туберкулезом детьми и подростками (1% и 1%, соответственно). Эти генотипы являются маркерами резистентности в отнощении туберкулезной инфекции. Отсутствие выявленных генотипов в тувинской популяции возможно определяет повыщенную заболеваемость туберкулезом коренного населения Республики Тыва .

2. Генотип А/А сайта +874 гена IFNy является маркером предрасположенности к заболеванию туберкулезом в обследованной группе детей и подростков европейской популяции. Наличие этого генотипа у большинства обследованных здоровых детей и подростков в тувинской популяции (84%) может способствовать повышенной заболеваемости туберкулезом коренной национальности. При этом, данный генотип ассоциируется с заболеванием туберкулезом в целом, а не с отдельными его формами .

3. Сравнение уровня цитокинов (IFNy, TNFa, IL-ip, IL-10) у больных европейской и Тувинской популяций до начала противотуберкулезной химиотерапии показало, что только уровень IFNy у больных тувинской популяции до начала лечения был достоверно ниже (р=0,0005), чем у больных европейской популяции .

4. Успешная противотуберкулезная химиотерапия приводила к достоверному снижению уровня IFNy и IL-10 к 6-му месях^у пребывания в стационаре, уровень IL-ip не изменялся, а уровень TNFa достоверно возрастал. Наиболее значимым для оценки тяжести туберкулезного процесса и эффективности проводимой терапии оказался IFNy, уровень которого у больных туберкулезом детей и подростков достоверно снижался на 20% в процессе химиотерапии .

5. У больных со скудной клинической картиной уровень сывороточного IFNy при генотипе А/Т сайта +874 гена IFNy в 1,75 раза (р=0,023) выше, по сравнению с уровнем IFNy при генотипе А/А до начала лечения. При сравнении групп больных со скудной и выраженной клинической симптоматикой получены достоверные различия (р=0,005) по уровню IFNy при генотипе А/А сайта +874 гена IFNy: уровень IFNy был в 1,4 раза выше при выраженной клинической симптоматике .

Список работ, опубликованных по теме диссертации .

1. Поспелов А.Л., Кордичева СЛО. Влияние некоторых локусов гена NRAMP1 у детей и подростков на предрасположенность к туберкулезу. Сборник тезисов научно-практической конференции молодых ученых «Новые технологии в эпидемиологии, диагностике и лечении туберкулеза взрослых и детей» / Москва, 2009. - С. 75-77 .

2. Поспелов А.Л. Влияние некоторых локусов гена NRAMP1 и IFNy у детей и подростков на предрасположенность к туберкулезу. Сборник тезисов научнопрактической конференции молодых ученых «Новые технологии в эпидемиологии, диагностике и лечении туберкулеза взрослых и детей» / Москва, 2 0 1 0. - С. 107-109 .

3. Поспелов А.Л., Кордичева С.Ю., Сороко-Новицкая А.Н., Поспелов Л.Е., Чистякова Н.И., Матракшии А.Г., Хайжок В.П., Ставицкая Н.В., Гсргерт В.Я., Авербах М.М. Полиморфизм локуса INT4 гена NRAMP1 у детей и подростков с локальным туберкулезом и поствакцинальными осложнениями // Туберкулез и болезни легких. - 2010. - №7. - С. 63-65 .

4. Поспелов А.Л., Матракшин А.Г., Чистякова Н.И., Поспелов Л.Е. Влияние полиморфизма генов IFNG и IL-10 на восприимчивость к туберкулезу в различных популяциях / Сб. трудов XX Национального конгресса по болезням органов дыхания / Москва, 2010, Дуайн Пресс, с.141-142 .

5. Pospelov L., Pospelov А., Kordicheva S. Peculiarities of inherited susceptibility to lung tuberculosis in Tuva republic / Workshop: Research opportunities in ТВ drug discovery and diagnostics / Moscow, 2010. p42 .

6. Поспелов А.Л. Корреляция мутации гена IFNy с уровнем IFNy при различных клинических параметрах у больных туберкулезом / Сборник тезисов научнопрактической конференции молодых ученых «Новые технологии в эпидемиологии, диагностике и лечении туберкулеза взрослых и детей» / Москва, 2 0 1 1. - С. 66-68 .

7. Поспелов А.Л., Авербах М.М., Губкина М.Ф., Поспелов Л.Е. Влияние полиморфизма геиов IFNy и IL-10 иа синтез цитокинов при туберкулезе легких у детей и подростков// Туберкулез и болезни легких. - 2011. - №3 .

- С.52-57 .

8. Поспелов А.Л., Авербах М.М., Губкина М.Ф. Уровень синтеза IFNy, TNFa, IL-ip и IL-10 на разных этапах лечения туберкулеза у детей и подростков// Туберкулез и болезни легких. - 2011. - №8. - С.36-40 .

Список сокращений

NRAMP - Макрофагальный белок, ассоциируемый с естественной резистентностью IFNy - интерферон гамма IFN-yR - рецептор интерферона гамма IL-10 - интерлейкин 10 IL-ip-интерлейкин 1 бета TNFa - фактор некроза опухолей альфа HLA - главный комплекс гистосовместимости человека ТБ - Туберкулез МБТ - Mycobacterium tuberculosis ИТ - инфильтратиБный туберкулез ОТ - очаговый туберкулез ПТК - первичный туберкулезный комплекс ТВГЛУ - туберкулез внутригрудных лимфатических узлов




Похожие работы:

«АЛГОРИТМЫ РАБОТЫ С ПРОГРАММОЙ "Gr-I-B" 2014-02 версия 1.9.2 Gr-I-B: GrГрафические, IИндивидуальные ("IM@GO"), BБио-хроно-кибернетические циклы.1. Запуск программы. (кликаем "мышью" ярлык): появляется темати...»

«Хапчаев Аскер  Юсуфович ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ  КИНАЗЫ ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ  МИОЗИНА И  БЕЛКА KRP  В РЕГУЛЯЦИИ  СОКРАТИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ  ГЛАДКИХ МЫШЦ 03.00.04 - Биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени...»

«Сценарий внеклассного мероприятия Питание и здоровье Автор: учитель биологии высшей категории Новикова Н.Н. ЦЕЛИ: Пропагандировать здоровый образ жизни; активизировать познавательную деятельность учащихся; заинтересовать учащихся изучением вопросов з...»

«БЕЛЕВИЧ Ольга Эдуардовна СТРЕКОЗЫ РОДА AESHNA (ODONATA, ANISOPTERA) ПАЛЕАРКТИКИ Специальность  03.00.09 - энтомология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических  наук Новосибирск - 2005 Работа выполнена в лаборатории Экологии насекомых Института систематики и экологии животных Сибирского отделения РАН доктор биологических наук,...»

«1С • ггп: МАЛЫШЕВА Зинаида Георгиевна ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ПОДГОТОВКИ СЕМЯН ОРЕХОПЛОДНЫХ ПОРОД к ПОСЕВУ (на примере Ростовской области) П.00.11 Охрана окрз^ающей среды и рациональное использо­ вание природных ресурсов 06.03.01 Л...»

«СУХОВА Инна Витальевна I БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СПЕРМЕ I ЧЕЛОВЕКА ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ МИЛЛИМЕТРОВОГО ДИАПАЗОНА 03.00.04 биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2005 Работа выполнена на к...»

«У ЗОГРАФ ЮЛИЯ КОНСТАНТИНОВНА Ультраструктура мужской половой системы и сперматозоидов у свободноживущих морских нематод из отряда Chromadorida 03.00.25 гистология, цитология, клеточная биология 03.00,08-зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степен...»






 
2018 www.lit.i-docx.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.